噬菌体抗体库技术概述

蔡尽忠

(福建省厦门华厦学院检验科学与技术系 361021)

20世纪80年代中期，Smith等[1]在丝状噬菌体分子生物学研究的基础上提出了噬菌体展示技术(phage display technique)。1989年，英国Winter研究组和美国Lernard研究组同时创建了噬菌体抗体库技术(phage antibody library technique)。1990年，McCafferty[2]在丝状噬菌体表面成功展示具有抗原结合能力的抗体片段，进一步推动了噬菌体抗体库技术的研究。

噬菌体抗体库技术是利用PCR扩增出抗体的全套可变区基因，利用噬菌体表面展示技术把Fab段或单链抗体(ScFv)表达在噬菌体表面，并进一步通过“吸附—洗脱—扩增”方法筛选和富集特异性抗体的技术[3]。这一技术将表型与基因型联系在一起，将抗体识别抗原的能力与噬菌体扩增的能力结合在一起，是一项极为高效的表达、筛选体系，在生物技术领域极具应用前景[4]。本文综述噬菌体抗体库的构建原理、技术过程及应用。

1 噬菌体抗体库的技术原理

噬菌体展示技术是一种基因表达和筛选的技术，即将外源蛋白分子或多肽的基因克隆到丝状噬菌体基因组中，与噬菌体外膜蛋白融合表达，展示在噬菌体颗粒的表面[5]。这样，外源蛋白或多肽的基因型与表型统一在同一噬菌体颗粒内，通过表型筛选就可以获得相应的编码基因。

虽有多种外壳蛋白被用于噬菌体展示，但目前文献报道的用于抗体分子展示的主要是PⅢ蛋白和PⅧ蛋白[6]。PⅢ蛋白位于噬菌体颗粒的尾端，含有406个氨基酸残基，由3个结构域组成，每个噬菌体含有3～5个副本。3个结构域由甘氨酸富集的连接肽串联起来，在结构上具有高度易变性和灵活性，故其N端可以插入较大的外源片段而不影响噬菌体的结构和功能，而且融合表达的外源片段还可保持相对独立的结构构象[7]。……