FQ—PCR检测丹江口地区解脲支原体、沙眼衣原体的五年回顾性研究

邓莉++宋丹++方正春

摘要：目的 分析研究实时荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）对解脲支原体、沙眼衣原体的检测结果，以了解本地区在不同性别及年龄段的感染情况。方法 选取1000例疑似非淋菌性尿道炎患者，均采取FQ-PCR进行检测，统计分析不同男女性别及年龄段的阳性检出率。结果 UU和Ct的检出率为44.50%，其中在女性患者中的检出率（55.31%）要明显高于男性（35.58%）（P<0.05）。其中女性患者UU的检出率（37.61%）显著高于男性（18.25%），差异具有统计学意义（P<0.05），而Ct和UU+Ct在不同性别间检出率无明显差异（P>0.05）。18～40岁患者的阳性率（81.35%）显著高于年龄大于40岁患者（18.65%），差异显著（P<0.05）。结论 FQ-PCR对UU、Ct的检出率较高，本地区以女性患者及18～40岁年龄段的检出率较高，应加大对上述人群的监管力度。

關键词：FQ-PCR；解脲支原体；沙眼衣原体

A Retrospective Study of FQ-PCR in Danjiangkou Area of Ureaplasma Urealyticum and Chlamydia Trachomatis in Five Years

DENG Li1，SONG Dan1，FANG Zheng-chun2

（1.Department of Clinical Laboratory，The First Hospital of Danjiangkou City，Danjiangkou 442700，Hubei，China；2.Department of Anesthesiology，The First Hospital of Danjiangkou City，Danjiangkou 442700，Hubei，China）

Abstract：Objective Analysis of real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （FQ-PCR）of Ureaplasma urealyticum and Chlamydia trachomatis detection results， in order to understand the region in different gender and age of infection. Methods A total of 1000 cases of suspected patients with nongonococcal urethritis， FQ-PCR detection. Statistical analysis of different gender and age of the positive rate. Results The detection rate of UU and Ct was 44.50%， among which the detection rate （55.31%） in female patients was significantly higher than that in males（35.58%）（P<0.05）.The detection rate of UU（37.61%）in female patients was significantly higher than that in male （18.25%）， and the difference was statistically significant（P<0.05），while there was no significant difference between UU+Ct and Ct （P>0.05）. The positive rate （81.35%） of 18-40 years old patients was significantly higher than that in patients older than 40 years （18.65%）， and the difference was significant （P<0.05）. Conclusion The detection rate of UU in FQ-PCR and Ct is higher， the detection rate of female patients in the local area and the age of 18～40 years old is higher， and the supervision of these people should be increased.

Key words：FQ-PCR；Ureaplasma urealyticum；Chlamydia trachomatis

在临床中，非淋菌性尿道炎（nongonococcalurethritis，NGU）属于常见性传播疾病[1-2]。该病在欧美等发达国家、地区的发病率居首位，且自2001年以来我国报道NGU发病率已经超过淋病，在全国监测8种性传播疾病中居首位。NGU及并发症，如睾丸炎、前列腺炎、盆腔炎、不孕不育等对人类的健康构成极大的危害。因此需要对该症进行及时诊断，以免耽误治疗[3-5]。而据统计在NGU中40%～70%的病例由解脲支原体（UU）和沙眼衣原体（Ct）引起。以前由于检测手段的限制，对UU和Ct检出率较低，无法及时治疗。近年来随着医学的不断进步，检测手段也随之进步，尤其是FQ-PCR技术的应用使得UU和Ct检出率不断增高，已成为临床检测UU和Ct的首先方法。为了解本地区5年来NGU的发病特点，本次研究选取FQ-PCR检测方法对我院在2009年1月～2014年12月收治的疑似NGU进行检测，结果如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取我院在2009年1月～2014年12月收治疑似NGU患者1000例，病程为1 w～1年，男性主要表现为尿道口出现红肿，分泌物较多，且尿频；女性主要表现为阴道分泌增物多、瘙痒，且少数伴尿频及下腹痛等。1000例患者中，男548例、女452例，年龄18～56岁，平均（38.89±3.45）岁。

1.2方法 标本采集：对于女性患者采取阴道窥器进行扩张阴道，选取无菌棉拭子将宫颈口过多分泌物涂去，用无菌拭子插入至宫颈管内的1 cm处，将其停留15 s左右并旋转3～5周，采集宫颈的分泌物，然后把棉拭子插入至试管中（盛有1ml无菌的生理盐水）并将其洗下。对于男性患者将棉拭子插入至尿道口约2～4 cm，转动数次拭子后立即将其放在试管中（盛有1 ml无菌的生理盐水）。将棉拭子进行充分的洗涤，贴着壁将棉拭子中水分挤出，待混匀后，转入至离心管内以12000 r/min的速度离心10 min，弃上清，重复一次。加入50μl核酸提取液，在100℃下干浴10 min，再以12000 r/min的速度离心5 min，取上清液2 μl进行PCR反应。应用PCR检测技术检测UU、Ct，并对检测结果进行统计分析 。

1.3统计学意义 数据采用SPSS18.0进行处理，计量数据用平均值±方差（x±s）表示，t检验，计数资料用χ2检验，P<0.05差异具有统计学意义。

2 结果

2.1男女患者病原体检出率比较 病原体检出率为44.50%，女性患者的检出率（55.31%）要明显高于男性（35.58%）（P<0.05）。其中女性患者UU的检出率（37.61%）显著高于男性（18.25%），差异具有统计学意义（P<0.05），而Ct和UU+Ct在不同性别间检出率无明显差异（P>0.05），见表1。

2.2不同年龄层次病原体检出率比较 18～40岁患者的阳性率（81.35%）显著高于年龄大于40岁患者（18.65%），差异显著（P<0.05），见表2。

3 讨论

NGU是一类经过性传播泌尿生殖系统的炎症，近年来，据报道在西方国家和我国部分省市发病率均已经超过传统淋病和梅毒，居于各类性传播疾病的首位，NGU发病比较缓慢并且无明显临床症状，往往因隐匿性的感染而延误了治疗，因此易导致严重并发症[6-7]。

UU是常见的且被公认的生殖泌尿道感染致病病原体，其大小介于病毒和细菌之间，无细胞壁，呈现多形性，且可在无活动的细胞培养基中进行繁殖。Ct寄生于真核细胞内，具有独特的发育周期，早期Ct感染无特殊的临床表现而容易漏误诊[8-9]。CT和UU均寄生于泌尿生殖道，能够通过性进行传播，同时也可以通过孕妇血液及生殖道等途径传播给胎儿和新生儿，可引前列腺炎、不孕症、早产等多种疾病[10]。

因此早期的诊断和治疗及其重要，但是以前由于受到检验技术限制，未引起人们重视。细胞培养法虽然一直作为诊断的金标准，特异性和敏感性均较高，但对条件和技术要求高，且复杂费时，很难在临床实验室中开展。直接免疫荧光技术检测CT抗原，该法快速、简便、特异性好，费用低，重复性好，但敏感性不佳。PCR被广泛应用在核酸的分析中，PCR法直接检测病原体基因是最直接的感染证据，并且简单快速，可以在数小时内得到明确的结果。PCR法的高敏感性，可以把目的基因片段在短短的数小时内扩增至数万倍以上，但是普通的PCR技术具有扩增产物容易污染、无法定量以及致癌物危害等缺点，近年来经过研究出现了新的检测方法FQ-PCR，采用荧光技术及闭管检测，避免了交叉污染，且对UU、Ct的检测有高度特异性及敏感性，完全克服上述缺点。目前实时荧光定量PCR技术成熟，因此不易造成漏诊，这对患者感染的极早期或潜伏期或无症状带菌者的诊断有相当重要的意义，是值得推荐的检验方法[11-12]。

本次研究显示病原体的检出阳性率为44.50%，检出率较高，与报道相似。而女性的检出率为53.10%，显著高于男性（35.58%），差异显著。其中Ct、UU+Ct的阳性检出率在不同性别之间无显著性差异，而UU在女性的检出率（37.61%）要显著高于男性检出率（18.25%），差异显著，这可能和男女泌尿生殖道不同密切相关，相对而言女性的泌尿生殖道更适于UU的生长而男性生殖道在进行排尿时有一定的冲洗作用，从而排掉了部分的病原体。

据报道从该病的年龄构成分布结果显示约80%的感染者年龄小于40岁。一方面与性接触史或者配偶感染史有关系；一方面与该年龄段处于生育活动高峰年龄有关；一方面与此年龄段的女性性行为比较活跃，喜欢穿紧身衣裤或者在非经期使用护垫引起会阴部潮湿而导致病原菌繁殖等一系列生活习惯相关；另一方面与该年龄段的男性工作、社交频繁、生活压力较大、吸烟喝酒等一系列不良社会行为密切有关。本次研究显示18～40岁的感染率为81.35%，略高于文献报道，这说明本地区要对青壮年尤其是青年人加强性相关道德教育以及性传播疾病的相关科普知识，并对高危人群加强监测力度。

参考文献：

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编辑/安桦