滇丹参中丹酚酸B提取及纯化工艺研究

石原

摘 要：目的：对滇丹参中的丹酚酸B进行提取，采用絮凝沉降法的方式对丹酚酸B进行纯化，以达到最佳的制备工艺手法。方法：在滇丹参中，主要的成分就是丹酚酸B，以丹酚酸B作为最主要的评价指标之一，运用正交试验的方式作为最佳的条件，以此作为提取工艺，进而得到最佳的优化条件。结果：通过实验能够得到最佳的优化条件为选取8倍的水量，反复进行2次的煎煮，每次煎煮的时间为1小时，絮凝沉降剂则选择ZTCl+1，在絮凝剂的使用过程中，用量是B：A=4：2，每分钟进行100r的搅拌，在这样的环境下能够获得最佳的丹酚酸B含量，这一含量也是最高的。结论：采用絮凝澄清的方式可以更快的获得精制水提液，并且具有用量少以及污染小的特点，这样能够保证丹酚酸B的含量损失减少到最小。

关键词：滇丹参；丹酚酸B；ZTCl+1型絮凝剂

在治疗调经、活血等症状的过程中，经常会使用到滇丹参这种药物，这种药材属于唇形科鼠尾草属植物，从性质上来看微寒，具有微微的苦感，在治疗月经不调、吐血症以及子宫出血等疾病中具有十分显著的效果，通过对现代药理作用的研究中可以发现，滇丹参可以促进冠状动脉血流量的进一步提升，有效的预防血栓的出现，还能防止血小板的进一步聚集，这样血黏度也能得到下降，将自由基消除掉，血管的内皮功能也可以得到改善。除此之外，滇丹参还能治疗冠心病，有效的预防手术后出现血管再狭窄的现象，在这一过程中都能获得十分重要的作用。在滇丹参的主要构成中，主要包含具有水溶性的酚酸类成分，还具有脂溶性的丹参酮，在水溶性成分中，丹酚酸B具有较高的含量，并且还具有较强的活性，所以能够起到抗氧化的作用，同时也能将自由基清除掉。因此本文重点对丹酚酸B的主要含量进行检测，并且对纯化工艺加以进一步的优化。

1 仪器与试药

1.1 仪器。Waters e2695型高效液相色谱仪（美国）；FBl24型电子分析天平（上海舜字恒平科学仪器有限公司）；SK250HP型超声提取器（上海科学仪器有限公司）。

1.2 试药。丹酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111562-200302）；滇丹参（购于云南绿生药业有限公司）；ZTCl+1天然澄清剂（购于天津正天成澄清技术有限公司）；乙腈、甲醇为色谱纯；水为去离子水；其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 丹酚酸B含量测定。首先精密的称取一定含量的丹酚酸B对照品，在其中加入适量的甲醇，甲醇的容量为75%，制得溶液0.192mg，在相应的色谱条件下，选取甲醇、乙腈、甲酸以及水作为流动相，流动相的体积比为26：9：1：64，将色谱柱的温度调节为35℃，检测波长为286mm，每分钟的流速为0.8mL，从理论上得到丹酚酸B的塔板数不得低于2000。紧接着对线性关系进行考察，同样是精确的称量对照品溶液，分别称取不同μL的溶液进行测定，纵坐标是峰面积积分值，横坐标为对照品的进样量，这样能够得到一个线性的回归方程，结果显示在进样量为0.768至2.688μg的情况下能够获得良好的线性关系。在对样品进行测定的过程中，先对对照品溶液以及供试品的溶液进行精密的吸取，每10μL进样，采用外标法对含量进行计算。

2.2 提取工艺研究。在选择提取溶剂的过程中，先选取40g的药材，药材称量的精确度要十分准确，达到0.01g的标准，将其平均分为4份，在4份药材中分别加入水、30%的乙醇、50%的乙醇以及70%的乙醇，以此作为溶剂，并且加入8倍量的溶剂，经过1.5h以后进行过滤，在过滤完滤渣以后，选取6倍的量溶剂进行提取，在1h以后将滤液合并在一起，对滤液进行浓缩，达到500mL的定容量，采用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，进行精密的称量，得到10μl的溶液，将其注入到液相色谱仪中，对丹酚酸B的含量进行检测，检测结果分别是2.18%、2.45%、2.37%以及2.09%。表明30%乙醇提取含馈最高，但以水为溶剂时，与30%乙醇提取率相差不大，因考虑实际生产的需要，故以水为提取溶剂。

2.3 絮凝澄清纯化工艺研究。ZTC1+l澄清剂溶液的配制。①A组分溶液的配制称取ZTCl+1Ⅲ澄清剂A组分1g，先用少量蒸馏水搅成糊状，然后加蒸馏水至100mL，溶胀24h，搅匀，双层纱布滤过，即得l%A组分黏胶液；②B组分溶液的配制称取ZTCl+1Ⅲ澄清剂B组分1g，用少量1%醋酸溶液溶解并搅成糊状，然后加l%醋酸至100mL，溶胀24h，搅匀，双层纱布滤过，即得1%B组分黏胶液。

经过预实验，发现丹酚酸B在60℃时絮凝效果较好，故以60℃为絮凝温度，采用正交试验对絮凝澄清工艺的主要工艺参数进行优化。选择药液浓度、ZTCl+1絮凝剂加入量、搅拌速度3个主要影响因素进行考察，以丹酚酸B含量作为评价指标，用L9（34）正交表安排试验方案，因素水平设计见表1。

上述最佳提取工艺提取药材，按正交试验设计浓缩至不同浓度，分别量取9份浓缩药液，每份50mL，在60℃时，加入4mL的1%B组分溶液用相应的旋转速度搅拌15min，保温1h，搅拌3min，然后每隔30min左右搅拌3min；1h后，于60℃温度恒温搅拌下，分别加入1%A组分黏胶液搅拌3min，保温15min。离心过滤，精密量取1mL定容至100mL，用0.45μm的微孔滤膜滤过，测定丹酚酸B含量。实验结果为表2、表3。

3 讨论

丹酚酸B在水提液中具有不穩定的特点，如果提取时间过长以及温度过高的情况下都会对丹酚酸B的含量造成一定的影响，使其含量进一步的下降，因此在实验的过程中需要对丹酚酸B进行降解处理，这样才能保证实验的顺利进行。在实施纯化工艺的过程中，结果显示在药液浓缩比为1：5时能够保证具有最高的保留率，药液会随着时间的推移而变得越来越稀，因此丹酚酸B的含量也会变得越来越低。在絮凝剂的组分中，A组分的比例会有所增加，与之相反的结果是丹酚酸B的含量会出现降低的趋势，因此在B：A=4：2的情况下能够达到最佳的效果。采用ZTC1+lⅢ型絮凝澄清剂能够将溶液中所含有的胶质以及蛋白质有选择性的分离开来，并且实现共沉的效果，这种澄清剂没有毒素，具有安全性的特点，在使用过程中也更加方便，不会对有效成分造成损害。与水提醇沉的工艺相比，采用文中提到的方法能够进一步的提高目标含量，可以有效的减少生产周期与成本，并且在制备的过程中具有吸湿性较低的特点。

参考文献

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