实时荧光定量PCR非特异性分析*

姜文灿，岳素文，何赏，陈琛，孙慧珍，江洪，王成彬

(1.中国人民解放军总医院临检科，北京 100853；2.北京泰格瑞分子检验有限公司，北京 100085；3.温州医科大学检验医学院/生命科学学院，温州 325000 )

·专题笔谈·

实时荧光定量PCR非特异性分析*

姜文灿1,3，岳素文2，何赏1，陈琛1，孙慧珍1，江洪2，王成彬1,3

(1.中国人民解放军总医院临检科，北京 100853；2.北京泰格瑞分子检验有限公司，北京 100085；3.温州医科大学检验医学院/生命科学学院，温州 325000 )

聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)因灵敏度高、操作简便在各个领域得到了广泛的应用。然而，伴随其高灵敏度存在的非特异性问题在一定程度上限制了其应用。不同于普通检测方法，该技术的非特异性问题主要由可以指数扩增的引物二聚体(primer dimer, PD)引起。对此，引物设计时使用的中部同序引物对可以从根本上避免PD的产生，从而解决由其引起的非特异性问题。该文从PCR的发展和本质、PCR非特异性产生的原因和应对策略等方面作一总结及分析。

实时荧光定量PCR；非特异性；引物二聚体

聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)是在体外模拟体内核酸复制过程从而达到快速核酸检测目的的一门核心技术，相比于一般信号叠加的检测方法，其具有指数放大的模式使灵敏度提升了上百万倍。实时荧光定量PCR在传统PCR基础上加入信号系统对反应过程进行实时监测，继承了传统PCR灵敏度高和操作简便的特点，实现了对样本的定量检测，并进一步提升了PCR技术的灵敏度。该技术在医药卫生、生物科学、农业科学等方面得到了广泛的应用[1-3]。……