妇科腹腔镜术后恶心呕吐与HTR3B基因多态性的研究

黄晓东 陈敏敏

妇科腹腔镜术后恶心呕吐与HTR3B基因多态性的研究

黄晓东 陈敏敏

目的 探讨HTR3B基因多态性与妇科腹腔镜患者术后恶心呕吐（PONV）发生率的相关性。方法 选择255例妇科腹腔镜手术患者，根据是否发生恶心呕吐分为呕吐组和非呕吐组。采用DNA直接测序HTR3B基因中rs1185027，rs4936285，rs3758987，rs12795805四个单核苷酸多态性位点在两组患者中的等位基因和基因型分布，结果 呕吐组rs3758987 位点TT基因型分布频率较无呕吐组低，呕吐组T等位基因频率显著低于无呕吐组（P＜0.05，OR=1.60，95%CI=1.00～2.55）。呕吐组连锁不平衡分析发现单倍型（rs1185027- rs3758987- rs4936285），随访期间rs3758987不同基因型术后呕吐发生率存在差异，log-rank检验统计量为19.34，P＜0.05。Kaplan-Meier分析结果显示，不同基因型之间呕吐累积发生率有显著差异（log-rank=19.34，P＜0.05）。结论 HTR3B基因rs3758987位点多态性与中国汉族女性人群PONV发生率具有相关性。

术后恶心呕吐 5-羟色胺3受体 单核苷酸基因多态性

术后恶心呕吐（PONV）是麻醉和手术后常见的并发症，随着妇科腹腔镜微创技术的广泛使用，发现妇科腹腔镜手术PONV发生率较高，女性PONV发病率是男性的2～3倍，其他PONV危险因素，有PONV病史、晕动病史、麻醉药物及阿片类药物等，其次还有种族、手术方式以及特定人群［1］。5-羟色胺3受体（HTR3）是兴奋性的配体门控离子通道，5-羟色胺（5-HT）可以通过HTR3在中枢和外周神经系统激发快速神经反应。Kaiser等［2］发现，癌症患者放化疗后呕吐与HTR3基因多态性具有一定的相关性。但国内就HTR3基因多态性与妇科腹腔镜术后呕吐相关研究较少，本研究拟通过病例-对照关联分析，以明确妇科腹腔镜手术患者PONV的发生率和影响因素，其次了解HTR3受体基因多态性对PONV易感性的影响。

1 临床资料

1.1 一般资料 选择2011年1月至2015年12月在杭州市妇产科医院（杭州市妇幼保健院）及杭州市第一人民医院实施全身麻醉下妇科腹腔镜手术的患者255例作为观察对象，其中纳入呕吐组145例，无呕吐组110例。呕吐组平均年龄（41.63±7.95）岁，平均体重指数（BMI）（21.33±3.58）；无呕吐组平均年龄（41.67±8.75）岁，平均BMI（21.88±3.64）。两组一般资料比较差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。入选标准：年龄18～65周岁，ASA I～II级，无语言和理解力障碍，能够提供病史和个人基本情况及月经史等情况。排除标准：有吸烟史；全身性疾病，包括血液病、自身免疫病、恶性肿瘤等；术前24h内有呕吐史或使用过止吐药。本研究经医院伦理委员会批准，患者及其家属知情同意并签署知情同意书。

1.2 麻醉方法 所有患者经严格围手术期准备，麻醉诱导予丙泊酚、芬太尼和阿曲库铵静脉注射，行气管插管，吸入七氟醚，丙泊酚和芬太尼持续静脉输注。麻醉过程中检测生命体征以及呼气末二氧化碳监测。术中记录生命体征、手术时间、术中输液量。拔出气管插管前30min每位患者均静脉注射阿扎司琼预防术后恶心呕吐。

1.3 资料采集 术前资料内容包括患者病史、术前各项生理指标。术中资料，内容包括手术麻醉时间、术中输液量、预防性止吐药物使用时间等。术后2～24h相关信息，内容包括恶心呕吐发生频率和时间、镇痛药物用量、止吐药的使用情况。呕吐和干呕均视为呕吐事件。恶心或呕吐事件间隔＞1min视为两次独立恶心或呕吐事件。

1.4 基因检测 获取患者知情同意。于入院次日清晨空腹留取5ml静脉血提取DNA。HTR3B基因SNP的选择基因多态性的检测，从HapMap 数据库汉族人群群体中选择SNPs（http：//hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/；public datarelease 24/phase II；II），基于Tagger 程序选择标签SNPs，定义参数为r2≥0.80和少见等位基因频率（MAF）≥5%最终选取代表性的SNPs位点共4个（rs1185027；rs4936285；rs3758987；rs12795805）。采用直接测序方法（见表1），读取个体的基因型。

表1 HTR3B基因SNPs位点分型所用引物及测序引物

1.5 统计学方法 基因型行哈迪温伯格平衡检验。采用SPSS20.0软件计算两组等位基因频率和基因型频率；两组间等位基因频率和基因型频率分布差异采用χ2检验。block根据D'＞0.9以及r2＞0.8进行定义。频率＜3%单倍型被排除不再进行统计学检验。气管拔管后24h内第一次发生呕吐的时间采用Kaplan-Meier生存曲线进行了评价，采用log-rank检验进行比较。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HTR3B基因多态性与术后呕吐的关系 HTR3B基因4个多态性位点的基因型分布均符合Hard-Weinberg 平衡定律。两组基因型及等位基因频率分布及统计学结果见表3、4。两组rs3758987基因型分布频率差异有统计学意义（P＜0.05），呕吐组TT基因型分布频率较无呕吐组低，呕吐组T等位基因频率显著低于无呕吐组（P＜0.05，OR=1.60，95%CI=1.00～2.55）。

表3 HTR3B基因多位点等位基因呕吐与无呕吐两组患者中的分布情况

表4 HTR3B基因多位点基因型呕吐与无呕吐两组患者中的分布情况

2.2 连锁不平衡分析 呕吐组连锁不平衡分析发现单倍型（rs1185027- rs3758987- rs4936285）高度连锁（D'＞0.9，r2＞0.8），无呕吐组未发现连锁不平衡，见图1、2。2.3 rs3758987基因多态性与术后呕吐的关系 随访时间为拔管后24h，总发生率为56.86%（145/255），经Kaplan-Meier法分析并绘制曲线后，随访期间rs3758987不同基因型术后呕吐发生率差异存在统计学意义（P＜0.05），log-rank检验统计量为19.34，见图3。

3 讨论

PONV是术后常见的并发症，本研究观察了妇科腹腔镜手术患者PONV的发生率和相关的影响因素。结果显示PONV发生率56.86%，在使用HTR拮抗剂阿扎司琼预防性治疗条件下，PONV的发生率仍较高。国内外研究普遍认为多种因素均可影响PONV的发生，包括年龄、性别、BMI，其次手术麻醉本身也为关键因素，如手术时间、手术类型、术中输液量等。吸烟及阿片类药物也为重要的影响因素，吸烟可影响多巴胺系统，从而降低呕吐发生率。阿片类药物可以通过兴奋或抑制胃肠系统，对PONV产生影响。外源性阿片受体激动剂如吗啡可以通过调节胆碱能神经的信号传递而影响肠道蠕动。也可通过抑制中枢性μ受体降低肠胃蠕动，延缓胃排空。此外，外源性阿片受体激动剂可以通过κ受体调节胆碱能受体信号的传输［3］。本研究尽可能规避上述影响因素，统一麻醉方式及阿片类药物剂量及种类，且入选对象均无吸烟史，两组手术时间及输液量均匹配，以减少偏倚因素。

PONV的发生涉及多种因素，国内外有研究指出［4-5］，HTR拮抗剂在临床上的使用明显降低PONV的发生，提示HTR3参与了PONV的发生机制，国外也有研究［6］发现基因遗传也是PONV发生的影响因素。HTR3A和HTR3B基因多态性与恶心呕吐具有一定的相关性。HTR3B基因（C-100 _102delAAG）的患者，化疗引起的恶心呕吐发生率明显增高。因亚洲人群和高加索人群HTR3B基因变异的单倍体分布不同，本研究根据中国汉族人群HTR3B基因多态性特点，最终选取代表性的SNPs位点共4个（rs1185027；rs4936285；rs3758987；rs12795805）。本资料结果提示，呕吐组rs3758987位点TT基因型分布频率较显效组低，T等位基因频率显著低于无呕吐组。提示rs3758987与PONV发生存在一定相关性。其机制考虑为rs3758987的遗传变异可能会导致HTR3复合蛋白功能异常，导致5-HT的信号传导障碍。故其变异将导致某些相关疾病的易感性，并影响药物的治疗效果。基因变异引起相关编码蛋白的氨基酸序列改变，影响相关蛋白功能表达的稳定性和功能。其次，呕吐组连锁不平衡分析发现单倍型（rs1185027-rs3758987- rs4936285）高度连锁，无呕吐组未发现高度连锁不平衡，推测发生在rs3758987附近的基因变异可能会影响HTR3B转录的稳定性或功能。

本研究不足之处：（1）未区分术后恶心和术后呕吐，将其作为同一个临床结果进行研究，存在一定的局限性。（2）缺少可能影响HTR3拮抗剂的药物的代谢酶和转运体的基因多态性的研究。（3）研究样本量相对较小。因此，本资料结果需要更大样本量研究进一步验证。

图1 呕吐组Linkage Disequilibrium分析

图2 无呕吐组Linkage Disequilibrium分析

图3 不同rs3758987基因型PONV累积发生率比较

［1］ 黄轶婷.昂丹司琼单用与联用地塞米松预防腹部术后恶心呕吐效果的Meta分析.中国医药导报,2013,10(3)：83-85.

［2］ Kaiser R Tremblay PB, Sezer O, Possinger K Roots I, et al. Investigation of the association between 5-HT3A receptor gene polymorphisms and efficiency of antiemetic treatment witll 5-HT3 receptor antagonists. Pharmacogeneacs,2004,14(5)：271-278.

［3］ Chimbira W,Sweeney BE.The effect of smoking on postoperative nausea and vomiting.Anaesthesia,2000,55(10)：1032-1033.

［4］ Ho KY Gan TJ. Pharmacology,pharmacogenetics, and clinical efficacy of 5-hydroxytryptamine type 3 receptor antagonists for postoperative nausea and vomiting.Curr Opin Anaesthesio, 2006, 19(6)：606-611.

［5］ Ma XX, Chen QX, Wu SJ, et al.Polymorphisms of the HTR3B gene are associated with post-surgery emesis in a Chinese Han population.J Clin Pharm Ther,2013,38(2)：150-155.

［6］ Tanaka M,Kobayashi D,Murakami Y,et al.Genetic polymorphisms in the 5-hydroxytryptamine type 3B receptor gene and paroxetineinduced nausea.Int J Neuropsychopharmacol,2008,11(2)：261-267.

Objective This study investigated whether common genomic variations of the HTR3B are associated with the incidence of postoperative vomiting in patients who underwent gynecological laparoscopic surgery. Methods We conducted a prospective observational study design of 255 consecutive patients who underwent laparoscopic surgery. According to whether there will be vomiting， divided into vomit group and non-vomit group. All of the patients were direct DNA sequencing was performed to detect polymorphisms of HTR3B（rs1185027，rs4936285，rs3758987，rs12795805）. Results Four single nucleotide polymorphisms（SNPs）in HTR3B were found.One of these（rs3758987 in HTR3B）was statistically associated with vomiting，The TT genetype of vomit group were lower than non-vomit group，The T allele in the frequency of the two group were different，the difference was statistically signifi cant.（P＜0.05，OR=1.60，95%CI=1.00～2.55）. In the analysis of Kaplan-Meier，The vomiting rates of genotypes exhibited signifi cantly different（log-rank=19.34，P＜0.05）.Conclusions The HTR3B rs3758987 SNP might serve as a predictor of postoperative vomiting in patients who undergoing gynecological laparoscopic surgery.

Postoperative nausea 5-HT3 receptor Single nucleotide polymorphisms

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