沉默Versican基因对鼠源性肝癌细胞株Hepa1-6体外增殖及迁移影响的研究*

李之曦， 王 力， 刘燕扬， 王喻义， 罗 锋， 曹 丹

(1.四川大学华西医院肺癌中心， 成都 610041; 2.四川大学华西医院腹部肿瘤科， 成都 610041)

沉默Versican基因对鼠源性肝癌细胞株Hepa1-6体外增殖及迁移影响的研究*

李之曦1， 王 力1， 刘燕扬1， 王喻义1， 罗 锋1， 曹 丹2△

(1.四川大学华西医院肺癌中心， 成都 610041; 2.四川大学华西医院腹部肿瘤科， 成都 610041)

目的： 检测Versican基因在鼠源性肝癌细胞的表达情况，观察沉默Versican基因对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响。 方法： 采用Western blot技术检测鼠源性肝癌细胞株Hepa1-6中Versican的表达。构建沉默Versican基因的shRNA质粒(shVCAN)稳定转染Hepa1-6，通过荧光显微镜观察shVCAN质粒转染效率，采用RT-PCR及Western blot技术检测Versican基因的沉默效率。CCK-8法检测稳定转染shVCAN质粒后Hepa1-6的增殖能力变化；划痕及Transwell实验检测稳定转染shVCAN质粒后Hepa1-6的迁移能力变化；免疫荧光及Western blot检测稳定转染shVCAN质粒后Hepa1-6上皮细胞-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关蛋白的表达情况。 结果： 鼠源性肝癌细胞株Hepa1-6中Versican蛋白呈阳性表达。荧光显微镜显示shVCAN质粒稳定转染Hepa1-6效率高；RT-PCR及Western blot显示，shVCAN质粒稳定转染Hepa1-6后，其内的Versican表达受到明显抑制。此外，shVCAN质粒稳定转染Hepa1-6后，其增殖及迁移能力降低，差异具有统计学意义(P<0.05)。同时，免疫荧光及Western blot显示，shVCAN质粒稳定转染的Hepa1-6内，EMT相关蛋白E-cadherin的表达上调，N-cadherin的表达下调。结论： 沉默鼠源性肝癌细胞株Hepa1-6内Versican基因的表达，其增殖及迁移能力均受到抑制，其部分机理可能与沉默Versican基因引发Hepa1-6内E-cadherin上调及N-cadherin下调有关。

肝癌； Versican； 增殖； 迁移； 上皮细胞-间质细胞转化

原发性肝癌(primary hepatic cancer，PHC)是我国最常见的恶性肿瘤之一，其中肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)占原发性肝癌的90%左右[1]。在我国的癌症患者中，肝癌位居死亡原因第二位，是预后最差的肿瘤之一。肝癌预后凶险，治疗效果不理想，平均生存期仅4～5个月[2]。由于肝癌的早期症状多不明显，且极易发生血道转移，故大部分肝癌患者就诊时已属中晚期，失去了手术治疗的最佳时机，其5年生存率只有7%，绝大多数患者死于肝癌的局部复发或侵袭转移[3]。……