人脐静脉内皮细胞对流感病毒血凝素的免疫应答研究

范国权 陈向伟

030001 太原，山西医科大学微生物与免疫教研室

流感病毒的季节性流行或大流行在人群中造成不同程度的死亡，也给养禽业及国际贸易造成巨大的损失。更为严重的是，近年来随着禽类流感的不断爆发，其突破宿主的种属屏障，感染包括人类在内的多种哺乳动物，对人类的公共卫生安全造成严重的威胁[1-4]。禽流感在活禽市场和家禽屠宰加工厂检出率非常高，大大增加了人们与其接触的机会[5]。2013年3月底在上海和安徽两地发现了H7N9型禽流感感染人病例，这些病例主要表现为典型的病毒性肺炎，部分病例可迅速发展为急性呼吸窘迫综合征并死亡[6]。之后疫情扩散更广泛，患者年龄出现了年轻化，病毒致病性也发生了变化[7]。有研究发现，流感病毒感染后可以造成机体的免疫病理损伤，血管内皮细胞在病毒感染激活固有免疫阶段起到非常重要作用[8]。本研究用H3N2、H9N2流感病毒的重组HA蛋白和灭活H9N2病毒分别接种内皮细胞，解析其在宿主细胞固有免疫应答中的作用，将为了解其他亚型病毒的致病机制提供一些参考。

1 材料与方法

1.1实验材料甲型流感H9N2(A/Chicken/Hong Kong/G9/97)重组血凝素(Hemagglutinin，HA)蛋白，甲型流感H3N2(A/X-31)血凝素HA蛋白购自Sino Biological Inc.。禽流感(H9亚型)灭活病毒(SD696株)购自乾元浩生物股份有限公司。IFN-β ELISA试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司。HUVECs，由实验室保存，按常规方法进行复苏、传代，实验用3～5代细胞。

1.2实验分组HA实验组按5 μg/ml剂量接种H3和H9亚型病毒HA于HUVECs，灭活病毒组按103EID50灭活A/Chicken/Shandong/6/96(H9N2)ml-1接种HUVECs，阴性对照组按正常细胞培养，所有组在37 ℃吸附1 h，弃上清液，洗涤后，每孔加入DMEM细胞维持培养基(含0.2% BSA)。……