大鼠细胞外信号调节激酶1基因3ʹ非编码区双荧光素酶报告载体的构建及rno-miR-15b-5p对其活性的影响

罗汉将，徐云峰，李晓晓，杨予涛，徐志卿

大鼠细胞外信号调节激酶1基因3ʹ非编码区双荧光素酶报告载体的构建及rno-miR-15b-5p对其活性的影响

罗汉将1，徐云峰2，李晓晓1，杨予涛1，徐志卿1

目的以大鼠细胞外信号调节激酶1(ERK1)基因3ʹ非编码区(UTR)为研究对象，构建含有ERK1基因3ʹUTR区的野生型以及突变型重组双荧光素酶报告载体，通过分析双荧光素酶报告载体的活性，明确rno-miR-15b-5p对报告载体的调节作用。方法采用miRNeasy Mini Kit提取大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞的总RNA，以PC12细胞的cDNA为模板，利用聚合酶链式反应(PCR)将ERK1基因3ʹUTR克隆到pmiR-RB-ReportTMvector中。利用重叠延伸PCR，将ERK1基因3ʹUTR中的rno-miR-15b-5p潜在的靶序列TGCTGCT分别突变成CGAACGT和GTACACG，并将突变的ERK1基因3ʹUTR克隆到pmiR-RB-ReportTMvector中。结果成功构建了包含ERK1基因3ʹUTR区的野生型报告载体pmiR-ERK13ʹUTR和突变型报告载体pmiR-ERK1-mut 3ʹUTR。利用荧光素酶活性检测系统，发现rno-miR-15b-5p mimic可以降低野生型报告载体的活性(P＜0.001)，但不影响突变型报告载体的活性。结论成功构建ERK1基因3ʹUTR区野生型和突变型双荧光素酶报告载体，初步证明ERK1基因3ʹUTR区是rno-miR-15b-5p的结合靶点。

rno-miR-15b-5p；细胞外信号调节激酶1；重叠延伸聚合酶链式反应；pmiR-ERK13ʹUTR；pmiR-ERK1-mut 3ʹ UTR；荧光素酶活性检测

[本文著录格式]罗汉将，徐云峰，李晓晓，等.大鼠细胞外信号调节激酶1基因3ʹ非编码区双荧光素酶报告载体的构建及rno-miR-15b-5p对其活性的影响[J].中国康复理论与实践,2017,23(2):166-172.

CITED AS:Luo HJ,Xu YF,Li XX,et al.Construction of rat extracellular signal-regulated kinase 1 gene 3ʹuntranslated regions dual-luciferase reporter plasmids and effect of rno-mir-15b-5p on its activitiy[J].Zhongguo Kangfu Lilun Yu Shijian,2017,23(2):166-172.

抑郁症是以显著而持久的心境低落、思维迟缓、认知功能障碍、意识活动减退和躯体症状为主要临床特征的精神疾病，但关于抑郁症发生的具体分子机制仍不明确。有研究表明，microRNAs(miRNAs)很可能作为一个重要的调节因子，通过影响突触的可塑性、神经的发生以及基因的表达，参与抑郁症发生[1]。……