成年小鼠心脏c-kit+干细胞的分离及诱导分化

文德重，周敏，薛松，姜爱侠，黄日太(上海交通大学医学院附属仁济医院，上海007； 上海交通大学医学院附属儿童医学中心)

成年小鼠心脏c-kit+干细胞的分离及诱导分化

文德重1，周敏1，薛松1，姜爱侠2，黄日太1
(1上海交通大学医学院附属仁济医院，上海200127；2 上海交通大学医学院附属儿童医学中心)

目的 从成年小鼠心脏中分离、纯化c-kit+干细胞，并观察其诱导分化结果。方法 取C57BL/ 6雄性小鼠3只，取心脏组织，将心脏解离成单个细胞。采用CD45磁珠、c-kit磁珠分选得到c-kit+干细胞。鉴定细胞纯度，观察细胞表型。观察所得心脏c-kit+干细胞球的形成情况，对其进行诱导分化，采用RT-PCR法观察诱导分化细胞血管平滑肌细胞的标志物α-SMA和sm-22α、血管内皮细胞标志物vWF、心肌细胞标志物cTnT、心脏干细胞标志物c-kit，观察诱导分化的细胞表型。结果 心脏c-kit+干细胞c-kit+纯度为89.3%，心脏干细胞表面表达c-kit抗体。原代c-kit+干细胞生长缓慢，传代后细胞生长较快，悬浮培养可形成心脏c-kit+干细胞球。与诱导第0天比较，诱导分化第14 d时心脏干细胞α-SMA、sm-22α、vWF、cTnT mRNA相对表达量升高，c-kit mRNA相对表达量降低,P均<0.05。心脏c-kit+干细胞在心肌细胞诱导分化培养基中培养14 d左右可见cTnT阳性细胞。心脏干细胞在无LIF的培养基中培养14天可见vWF、α-SMA阳性细胞。结论 成功从成年小鼠心脏分离心脏c-kit+干细胞，所得c-kit+干细胞c-kit+纯度高，可成功诱导分化为心肌细胞、血管平滑肌细胞及血管内皮细胞。

心脏干细胞；c-kit+干细胞；干细胞移植；缺血性心脏病

缺血性心脏病的发病率呈上升趋势[1]。干细胞移植修复梗死心肌是一种新兴的治疗方法。研究[2～4]表明，心肌梗死后，心脏干细胞移植可有效抑制心肌细胞的凋亡，改善患者心功能，同时移植后的心脏干细胞可分化为血管细胞和心肌细胞，改善缺血心肌的血液供应情况。心脏干细胞可取自患者自身，解决了临床关于胚胎干细胞的伦理、免疫排斥和致畸问题[5]，是目前细胞移植的研究热点。……