参芪抑瘤方药物血清对胃癌MGC—803细胞增殖的影响

马春林 吴红彦 李海龙 陈杰 张宣 李红亮

摘要：目的 观察参芪抑瘤方药物血清对胃癌MGC-803细胞增殖的影响，探讨其相关机制。方法 以参芪抑瘤方不同浓度药物血清干预胃癌MGC-803细胞后，MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期，qRT-PCR检测CDKN1B、CDKN1C基因表达，Western blot检测p27、p57蛋白表达。结果 3%、5%、10%药物血清作用于MGC-803细胞24、48、72 h，细胞增殖水平显著降低（P<0.01），且与时间和剂量呈依赖关系；3%、5%、10%药物血清作用于MGC-803细胞24 h后，G0/G1期细胞增多，S期细胞减少；qRT-PCR检测结果显示，与对照组和空白血清组比较，药物血清各剂量组MGC-803细胞CDKN1B、CDKN1C mRNA表达显著上调（P<0.01）；Western blot检测结果显示，与对照组比较，药物血清各剂量组MGC-803细胞p27、p57蛋白表达显著上调（P<0.01）。結论 参芪抑瘤方药物血清可抑制胃癌MGC-803细胞的增殖，其机制可能是通过调节CDKN1B、CDKN1C mRNA和蛋白表达，进而干预细胞周期。

关键词：参芪抑瘤方；药物血清；胃癌细胞；细胞增殖；细胞周期

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.03.013

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）03-0053-04

Effects of Medicinal Serum of Shenqi Yiliu Formula on Proliferation of Gastric Cancer MGC-803 Cells MA Chun-lin1， WU Hong-yan1，2，3， LI Hai-long1，2， CHEN Jie1， ZHANG Xuan1， LI Hong-liang1 （1. Gansu University of Chinese Medicine， Lanzhou 730000， China； 2. State Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Excavation Innovation and Transformation of Gansu Province， Lanzhou 730000， China； 3. Laboratory for TCM New Products Development Engineering of Gansu Province， Lanzhou 730000， China）

Abstract： Objective To investigate the inhibitory effects of medicinal serum of Shenqi Yiliu Formula on cell proliferation of gastric cancer MGC-803 cells； To discuss relevant mechanism. Methods After treated with different concentrations of medicinal serum of Shenqi Yiliu Formula， gastric cancer MGC-803 cells were tested by the following methods： MTT was employed to test the proliferation of gastric cancer MGC-803 cells； Flow cytometry was used to detect cell cycle； qRT-PCR was used to detect the genetic expressions of CDKN1B and CDKN1C； Western blot was employed to test the protein expressions of p27 and p57. Results When 3%， 5% and 10% medicinal serum of Shenqi Yiliu Formula was treated to MGC-803 cells for 24 h， 48 h and 72 h， proliferation of cells decreased significantly （P<0.01）， with time- and dosage-dependent relationship. When 3%， 5% and 10% medicinal serum of Shenqi Yiliu Formula was treated to MGC-803 cells for 24 h， cells in G0/G1 increased， decreased in S. qRT-PCR results showed that compared with the blank control group and the negative control group， mRNA expressions of CDKN1B and CDKN1C of MGC-803 cells in medicinal serum all dose group increased significantly （P<0.01）. Western blot results showed that compared with the blank control group， protein expressions of p27 and p57 of MGC-803 cells in medicinal serum all dose group increased significantly （P<0.01）. Conclusion Medicinal serum of Shenqi Yiliu Formula can inhibit MGC-803 cells proliferation and the mechanism may be through adjusting CDKN1B， CDKN1C mRNA and proteins expression to intervene in the cell cycle.

Key words： Shenqi Yiliu Formula； medicinal serum； gastric cancer cell； cell proliferation； cell cycle

基金项目：甘肃中医药大学研究生创新基金（2015CX11）；兰州市人才创新创业扶持项目（2015-RC-24）

通讯作者：吴红彦，E-mail：wuhy@163.com

参芪抑瘤方临床用于肿瘤的治疗，具有益气扶正、养血活血、化痰散结、清热利湿、解毒散结、通络止痛等功效。本实验在前期研究的基础上[1-3]，进一步探索优化后的组方——参芪抑瘤方药物血清对胃癌MGC-803细胞增殖的影响，探讨其相关机制。

1 实验材料

1.1 药物

参芪抑瘤方（苦参、黄芪、当归、贝母等），饮片由甘肃中医药大学附属医院提供，经甘肃中医药大学附属医院杨锡仓主任药师鉴定符合2015年版《中华人民共和国药典》规定。

1.2 细胞株

胃癌MGC-803细胞株受赠于甘肃省中医方药挖掘和创新转化重点实验室。

1.3 动物

SPF级SD雌性大鼠50只，6～8周龄，体质量（200±20）g，甘肃中医药大学实验动物中心，动物合格证号2001000000198。饲养于室温20～25 ℃、湿度45%～55%的清洁级实验动物房，喂标准饲料，自由饮水。

1.4 试剂

DMEM高糖培养基（Gibco），四季青胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司），胰蛋白酶（Gibco），噻唑蓝（Sigma），二甲基亚砜（DMSO，Sigma），反转录试剂盒（美国Roche），扩增试剂盒（韩国BIONEER），RIPA裂解液（北京普利莱基因技术有限公司），化学发光液（美国Thermo），一抗、二抗（艾菲生物技术有限公司）。……