诱导性表达人巨细胞病毒UL138蛋白的胃癌细胞株构建及其效应评价

张良，陈文静，郭刚强，孙祥威，叶璐璐，胡畅远，金劲激，沈贤，薛向阳

（1．温州医科大学附属第一医院 胃肠外科，浙江 温州 325015；2.温州医科大学 微生物学与免疫学教研室 分子病毒与免疫研究所 热带医学研究所，浙江 温州 325035；3.温州医科大学附属第二医院胃肠外科，浙江 温州 325027）

・论 著・

诱导性表达人巨细胞病毒UL138蛋白的胃癌细胞株构建及其效应评价

张良1，陈文静1，郭刚强2，孙祥威1，叶璐璐2，胡畅远1，金劲激1，沈贤3，薛向阳2

（1．温州医科大学附属第一医院 胃肠外科，浙江 温州 325015；2.温州医科大学 微生物学与免疫学教研室 分子病毒与免疫研究所 热带医学研究所，浙江 温州 325035；3.温州医科大学附属第二医院胃肠外科，浙江 温州 325027）

目的:构建可诱导表达人巨细胞病毒（HCMV）UL138蛋白的稳定遗传胃癌细胞系，并评价UL138对胃癌细胞的生物学效应。方法:将pCMV-tet3G质粒转染BGC-823胃癌细胞，通过G418及荧光素酶活性检测筛选BGCTet-on细胞株。再将含有UL138外源基因的pTRE3G-UL138质粒转染稳定BGCTet-on细胞株，通过G418及潮霉素双抗筛选，获得诱导性表达UL138基因的胃癌细胞（BGC-UL138Tet-on）。强力霉素（DOX）诱导后，采用Western blot验证UL138蛋白表达，采用流式细胞术及CCK8试剂盒检测UL138蛋白表达对胃癌细胞的生长周期及增殖的影响。构建荷瘤裸鼠模型，体内验证UL138蛋白表达对胃癌细胞增殖的影响。结果:成功构建了DOX诱导性表达的、携带UL138基因的BGC-UL138Tet-on稳转细胞株。UL138蛋白表达可显著抑制胃癌细胞增殖；流式细胞术检测显示UL138蛋白表达阻滞BGC-823细胞周期在G1期。荷瘤裸鼠模型体内实验发现，DOX腹腔注射诱导UL138蛋白表达后，BGC-UL138Tet-on移植瘤体积缩小甚至消失。……