福州2009—2014年甲型H1N1流感病毒株HA基因进化分析

陈智伟　姚栩　谢乃鸿

【摘要】 目的：分析福州地区2009-2014年甲型H1N1流感病毒株的HA基因序列和遗传特征。方法：采集流感样病例的咽拭子标本，用MDCK细胞培养法和Real-time RT-PCR法对6株分别来自2009-2014年的病毒株进行病毒分离、鉴定，HA基因片段通过RT-PCR法进行扩增后克隆到pMD18-T载体上，并测定6株病毒株的HA基因序列。通过生物软件BioEdit对该分离株和GenBank中相关毒株的序列进行基因进化树分析。结果：6株分离株的HA基因推导氨基酸序列与参考株A/California/04/2009相比，2009-2014年HA1区氨基酸发生了突变，主要是位于136、145、188、189、192和193位点。结论：近几年，福州地区H1N1流感的HA基因序列与世界流行的病毒参考株具有高度同源性，并多处氨基酸发生替换而产生抗原性漂移。

【关键词】 甲型流感病毒； 血凝素； 序列分析； 进化树

【Abstract】 Objective：To investigate HA genetic characteristic of influenza type A H1N1 virus in Fuzhou from 2009 to 2014.Method：Acquisition of influenza like cases of throat swab specimens by MDCK cell culture method and Real-time RT-PCR method in 6 strains from 2009 to 2014 were isolated and identified. The HA gene fragment was amplified and cloned into pMD18-T vector by RT-PCR method， and determination of HA gene sequences of 6 virus strains.The phylogenetic tree of the isolates and GenBank was analyzed by BioEdit.Result：The deduced amino acid sequence of HA gene of 6 strains compared to reference virus A/California/04/2009， HA protein of the isolate viruses from 2009 to 2014 had amino acid mutation in sites of 136，145，188，192 and 193.Conclusion：In recent years，the HA gene sequence of H1N1 influenza in Fuzhou region is highly homologous to the worlds most popular virus reference strains，and many amino acids are replaced to produce antigenic drift.

【Key words】 Influenza H1N1 virus； HA gene； Sequence analysis； Phylogenetic tree

First-authors address：Fuzhou Center for Disease Control and Prevention，Fuzhou 350004，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.07.002

2009年第一例甲型H1N1流感病毒在墨西哥被檢测出后在该地区流行，并在全世界各个国家和地区大流行。经过世界卫生组织（WHO）鉴定此型流感为“人感染猪流感”，后将其更名为“甲型H1N1流感”。2009年6月11日，界卫生组织将甲型H1N1流感流行级别提升至6级。猪流感病毒属正黏病毒科，A型流感病毒的负链RNA病毒，是引起猪呼吸道疾病的重要病原体[1]。此次流行主要是因为猪的呼吸道上皮细胞同时感染禽流感病毒受体和人流感病毒受体，从而在猪上皮细胞内进行基因重排（抗原转变，antigen shift），最近发现的H1N1流感病毒重组由于基因同源重组[2]。血凝素抗原（HA）蛋白是介导病毒和细胞表面结合的主要蛋白，也是流感的重要保护性抗原[3]。流感病毒感染同一细胞时常发生基因重排，从而产生新的病毒株。……