舞钢市禽衣原体病流行病学调查

杨艳丽

（舞钢市动物卫生监督所，河南舞钢 462500）

舞钢市禽衣原体病流行病学调查

杨艳丽

（舞钢市动物卫生监督所，河南舞钢 462500）

本试验采集了舞钢市8个乡镇的 20 个养殖场（户）的待检样品进行血清学和分子生物学检测。结果表明：8个乡镇禽衣原体血清阳性率分别为 45. 54%、42.66%、35.22%、30.23%、41.80%、26.12%、26.34% 和38.92%；分子生物学检查共检测出阳性数102个，阳性率为12.23%，其中喉头棉拭子样品、精液样品的阳性率分别为12.04% 和 14.29%，证实鹦鹉热嗜性衣原体己在鸡群中流行，并可通过种蛋垂直传播。

禽衣原体病；鹦鹉热嗜性衣原体；人畜共患病；血清学；荧光定量 PCR

衣原体病主要是由鹦鹉热嗜性衣原体（ACP）和流产嗜性衣原体感染畜禽引起的不同征候群的一种接触性人畜共患病[1]。由于衣原体可以感染各年龄段家禽，给养禽业造成巨大的经济损失，所以衣原体病的危害应引起足够的重视。为了掌握舞钢市禽衣原体病的流行情况，笔者于2014～2016 年对舞钢市禽衣原体病的流行现状进行了跟踪调查，从而为舞钢市研究制订禽衣原体病预防控制措施提供技术支持。

1 材料

1.1 样品

于2014年6月～2016年5月在舞钢市的八台镇、杨庄镇、武功乡、枣林镇、铁山乡、尚店镇、安寨乡和庙街乡8个不同地区的20个养殖场（户）共采集血清样品4368份，其中蛋鸡血清2 000份，肉鸡血清1050份，肉鸭血清1318 份；种鸡精液及喉头棉拭子样品834份，其中精液70份，喉头棉拭子764份。

1.2 诊断试剂

衣原体间接凝集诊断试剂盒（抗原批号为140524，稀释液批号为140524，阳 性 血 清 批 号 为140403，阴性血清批号为140524），购自中国农业科学院兰州兽医研究所。鹦鹉热嗜性衣原体核酸检测试剂盒（批号为20140615），购自北京索奥生物医药科技有限公司。

2 方法

2.1 间接血凝试验

（1）衣原体 IHA 抗原使用前摇匀。（2） 每孔加75µl稀释液。（3）在第1孔加入25µL被检血清，呈4倍递增稀释3孔（1；4～1：16），第3孔弃去25µl。同一板上同时设阳性、阴性和空白对照各2 孔。（4）每孔加入稀释的抗原25µL，置微型振荡器上振荡2 min，封口，在37℃下作用2 h 后判定结果。

结果判定标准：在对照孔成立的条件下，观察各待检血清孔，被检血清 1：16 孔为 + + 及以上凝集者为阳性，1∶4 孔为 ++ 及以下者为阴性。

2.2 荧光定量PCR法检测

2.2.1 衣原体基因组DNA提取

样品预处理。①精 液 样 品：将 精 液 充 分 混 匀，取 0.5 ml转 至1.5 ml干净离心管中，加入等体积的 4% Na OH 溶液，充分混匀，室温下放置 10 min，13 000 r/min离心5 min，弃上清液，保留沉淀；② 喉头棉拭子样品：取1 m l生理盐水加入到 5 ml离心管中，充分洗涤棉拭子，将 洗 涤 液 转 至 1.5 ml干 净 离 心 管 中，13 000 r/min 离心 5 min，弃上清液，保留沉淀。③DNA 提取。向上述标本中加入50µl核酸提取液 B 充分混匀，100 ℃裂解 10 min，13 000 r/min 离心 3 min，取上清液4µl 做 PCR 扩增。④ 阴性质控品处理。取50µl阴性质控品加入50µl核酸提取液 B，充分振荡，然后 100 ℃ 裂解10 min，13 000 r/min 离心 3 min，取上清液 4 µl做PCR扩增。⑤阳性质控品处理。直接取4µl阳性质控品进行 PCR扩增。

2.2.2 PCR扩增

从试剂盒中取出ACP－PCRMIX、Taq 酶系，室温融化并振荡混匀，10000 r/min离心10s。设所需要的PCR反应管管数为N（N =样本数+1管阴性对照+ 4管阳性对照），测试反应体系为ACP－PC RMIX 24µl、Taq 酶系2µl。

2.2.3 结果判定

（1）如果Ct值＜38，则试验样品的ACP DNA含量（基因拷贝数/ml）= Qty－Copies /ml。（2）如果38＜Ct值＜40，为灰区，建议重新检测，重新检测若仍然是38＜Ct值＜40，判为阳性，否则为阴性。（3）如果Ct值=40，则ACP DNA 含量（基因拷贝数/ml）＜1×102拷贝数/ml（低于检测下限）。

3 结果与分析

3.1 血清学检测结果

以 IHA 间接凝集法检测4368 份被检血清。八台镇、杨庄镇、武功乡、枣林镇、铁山乡、尚店镇、安寨乡和庙街乡的血清阳性率分别为45.54%、42.66%、35.22%、30.23%、41.80%、26.12%、26.34% 和 38.92%。舞钢市衣原体血清阳性率平均为36.97%。

3.2 病原学检测结果

共检测出阳性数102 个（喉头拭子阳性92份，精液阳性10份），阳性率为12.23%，其中喉头拭子样品、精液样品的阳性率分别为12.04% 和14.29%。证实鹦鹉热嗜性衣原体已在鸡群中流行，并可通过种蛋传染给子代。

[1] 邱昌庆.禽衣原体病研究进展[J].畜牧兽医科技信息，2002，（8）：16-17.

张随玲（1969—），女，养职工技师，主要从事畜禽疫病防治技术研究与推广工作。