猪瘟的实验诊断和防控措施

于艳萍

（黑龙江省动物卫生监督所，黑龙江哈尔滨 150001）

猪瘟的实验诊断和防控措施

于艳萍

（黑龙江省动物卫生监督所，黑龙江哈尔滨 150001）

猪瘟是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒（HCV）引起猪的一种急性疫病。急性病例表现为发病急、高热稽留和败血症；慢性病例表现为纤维素性坏死性肠炎。随着饲养管理方式的变化和饲养管理技术水平的提高，各种疫（菌）苗的广泛使用，猪瘟的发生和流行也发生了较大的变化，出现了非典型猪瘟、温和型猪瘟，并常以散发流行，流行时还常与其他病原体一起形成混合感染或继发感染。使猪瘟特征性临床症状现地不明显，并且常缺乏特征性病理变化。

猪瘟；实验诊断；防控措施

1 实验室诊断

猪瘟的实验室诊断方法有本种动物接种试验、鸡新城疫病毒强化试验、家兔接种验、间接血凝试验及其抑制试验、反向间接血凝试验、中和试验、琼脂扩散试验、荧光抗体试验、酶标抗体试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）等。其中检查病毒抗原的本动物种试验，虽然确切而可靠，但手续繁杂、所需时间较长、费用也较高，如非特别需要一般很少进行。

（1）病料采集：采取病猪的扁桃体、脾、淋巴结（置冰瓶内送检，不加固定剂）。

（2）试验方法：①免疫荧光染色法：该法是用来检测组织材料中是否存在有猪瘟病毒（抗原）的方法。此法约3h即可作出诊断，欧美一些国家已规定为猪瘟的标准诊断法。免疫荧光染色法又分为直接法和间接法两种。方法一：直接法。此法可因材料的处理方法不同而有两种实验程序。一是冰冻切片或触片，经丙酮固定15min、PBS液漂洗数次、以荧光抗体（市场有供应，如购不到也要自己制作）染色（37℃，30min）、以PBS液浸洗2～3次、缓冲甘油封片。以荧光显微镜检查，如见上皮细胞和淋巴细胞内有亮绿色荧光，即为阳性；呈青灰色或橙色无荧光者，则为阴性。二是将所取病猪组织先做成无菌悬液，接种于猪肾细胞单层培养物上，继续培养24～72h，取出后用荧光抗体染色，荧光显微镜检查，如见有亮绿色荧光斑，为阳性；反之为阴性。方法二：间接法。先用抗猪瘟抗体免疫羊，制备羊抗猪免疫球蛋白，用荧光素标记做成羊抗猪荧光抗体。将病猪的组织切片或触片分为两组，对照组用正常猪血清，实验组用抗猪瘟血清（1：4倍稀释）处理30min，洗后，两组同时用羊抗猪荧光抗体染色30min，漂洗、干燥、缓冲甘油封固，荧光显微镜下检查，对照组无荧光，实验组有荧光为阳性，均无荧光为阴性。

②鸡新城疫病毒强化试验：此法敏感性很高，几乎能与易感猪接种法相比，故在日本已定为检验猪瘟病毒的标准方法。猪瘟病毒和鸡新城疫病毒，单独在猪睾丸细胞培养中均不产生细胞病变，但在接种猪瘟病毒3d后再接种鸡新城疫病毒，不但可以产生明显的细胞病变，并且可提高鸡新城疫病毒的滴度。故可根据细胞病变的有无，间接地测知猪瘟病毒的存在。该强化试验可被抗猪瘟血清所抑制，这种抑制作用除作上述试验的对照组外，尚可用于猪瘟病毒的中和试验。试验方法：先将被检材料接种于猪睾丸细胞培养物中，继代适应后再接种106蚀斑成单位的新城疫病毒，37℃培养3d。根据是否出现细胞病变进行判定。同时应设对照组。若试验组出现有明显的细胞病变，而对照组没有出现细胞病变，则表示有猪瘟病毒存在。

③家兔接种试验：猪瘟病毒不使家兔发病，亦无体温反应，但能使之产生免疫性；而猪瘟兔化弱毒苗能使家兔发生热反应。试验时以病猪组织悬液或血液，除菌后肌肉接种家兔两只。7d后另取未注射病猪组织悬液的家兔两只作为对照，试验兔和对照兔同时静脉注射猪瘟兔化弱毒苗。每6h测温一次，连续3d。如实验组不出现定型热反应，而对照组出现定型热反应，即为阳性；如两组均出现定型反应则为阴性。

④酶联免疫吸附试验（ELISA）：猪瘟ELISA诊断试剂盒，中国兽药监察所有供。该试剂盒用于检测血清中的猪瘟病毒抗体，并且可以区分强毒（野毒）感染和弱毒（疫苗）免疫后所产生的抗体。操作方法按抗原说明书进行，若OD值≥0.5，判为猪瘟强毒抗体阳性；若OD值＜0.5，判为猪瘟强毒抗体阴性。该试剂盒是进行猪瘟抗体监测、了解猪群强毒感染状况和猪瘟流行病学调查十分有效的诊断试剂盒。

⑤间接血凝试验：用猪瘟病毒抗原致敏的醛化红细胞，检测血清中的抗体。当抗体滴度低于1：16时，应及时接种猪瘟弱毒苗。

2 治疗方法

目前还没有治疗猪瘟的有效药物，对贵重猪种在病的早期，可采用注射高免血清进行被动免疫来抢救。高免血清注射后没有诱导期，可立即发挥作用，但存在免疫期短（约为两周）和价格较高等问题。抗猪瘟血清的治疗量为1.0ml/kg；猪瘟苗原血清为2～3.0ml/kg，可作静脉或肌肉注射。为了促使猪只的早日康复可配合以对症疗法、支持疗法等进行综合性治疗。同群的健康猪，可用抗猪瘟血清或猪瘟苗原血清作紧急预防接种，其剂量减半。

抗猪瘟血清生物药厂很少生产，市场上一般购买不到，大、中型猪厂可以根据自身条件自己生产以备急用。抗猪瘟血清的制备：挑选体重70～80kg，未经过任何疫（菌）苗接种的健康猪，隔离饲养。首先每头猪接种猪瘟兔化弱毒疫苗2.0ml。10d后进行强化免疫，每头猪接种猪瘟兔化弱毒疫苗10.0ml；10d后，每头猪肌肉注射猪瘟血毒（猪血内加抗凝剂）50.0ml；再过10d，每头猪肌肉注射猪瘟血毒200.0ml；再过10d，每头猪肌肉注射猪瘟血毒400.0ml。在第4次攻毒后10～12d，由颈动脉采血，一次采完，并分离血清，此血清即抗猪瘟血清。若一时不用，可加0.01%硫柳汞防腐，分装无菌瓶内，置4℃冰箱可保存2年。猪瘟苗原血清的制备：选用确知已经猪瘟兔化弱毒疫苗免疫过的健康猪，再用200头份的猪瘟兔化弱毒疫苗强化免疫一次。经10～15d后，常规采血致死，按常规方法分离血清，加0.01%硫柳汞防腐，分装无菌瓶内备用，置4℃冰箱内可保存2年。另外，患猪瘟痊愈猪的血清抗体滴度极高，也可收集保存备用。

3 预防措施

该病传染性极强，死亡率甚高，一旦发生，就会导致严重损失。因此，平时应抓紧预防措施，杜绝该病的传入；发生之后，应立即采取紧急防疫措施，尽快扑灭疫情。（1）捕杀病猪。病猪一般以屠宰为宜，因为经过治疗，即使不死，也不易完全康复。从全局考虑，病猪存毒时间较长，保留病猪就等于保留传染源，不利于扑灭猪瘟。（2）平时预防。养猪场应经常做好清洁卫生工作，定期进行消毒，禁止非工作人员进、出，管理人员和运输车辆的进、出都应该进行严格消毒。（3）自繁自养。养猪场应贯彻自繁自养的方针，不从外地购入猪只。如确属必需，则应到饲养管理水平较高，疾病控制严密的猪场购入，猪只入场后应隔离饲养2～3周，并进行严格检疫，确认健康后方可并群饲养。（4）定期进行免疫接种。我国的兔化毒疫苗是全世界使用最广、也是最优秀的疫苗，接种后1周可产生免疫力，免疫期持续1年以上。免疫接种不仅可保护接种猪不发生猪瘟，而且可以减少受HCV强毒攻击时病毒的复制和向接触猪的传播。免疫接种应制定行之有效的免疫程序，在猪群免疫前，应对猪群进行抗体水平检测，根据抗体水平来确定接种时机。门常平等的研究表明，母源抗体滴度为1：32～1：64，此时攻毒可获得100%保护，当抗体滴度下降至1：16～1：32时尚能80%保护；当滴度下降至1：8时，则完全不能保护。一般认为，间接血凝试验所测的血清抗体滴度低于1：16时，应及时进行免疫接种。为了克服体内尚存抗体的干扰，可适当加大免疫剂量。为了防止免疫接种后的免疫应答受到母源抗体抑制，仔猪出生后应立即接种猪瘟兔化弱毒疫苗，2h再让仔猪吮吸初乳，这种哺乳前进行猪瘟兔化弱毒疫苗免疫接种的方法，有效地预防了猪瘟的发生，现以广泛推广应用。猪瘟免疫失败时有发生，其中有许多是由于亚临床感染猪瘟的怀孕母猪，病毒经胎盘感染胎儿所致，早期感染多发生流产；中后期感染则产弱仔，这些猪可终生带毒，形成持续感染，增加了猪场猪瘟不稳定性。防止猪群亚临床感染，可采用加大免疫剂量，母猪在配种前7～15d，一般以4头份剂量进行强化免疫，可取得良好效果。（5）紧急免疫接种。猪瘟兔化弱毒疫苗，安全性很好，免疫原性极佳，接种后4～6d即可产生对猪瘟的免疫力。成猪的免疫期可达18个月，乳猪的免疫期可达6个月。近年来的生产实践证明，在猪场发生猪瘟时，除病猪和潜伏期猪外，对无症状的猪以4～5头份的猪瘟兔化弱毒疫苗进行紧急预防接种，可迅速扑灭疫情。进行紧急免疫接种时，应注意不得使用二联或三联疫苗，也不可应用加有氢氧化铝胶等佐剂的稀释液，因佐剂能抑制早期免疫力的产生。

[1] 袁学华.猪瘟的实验室诊断及防控净化[A].中国畜牧兽医学会动物传染病学分会猪病防控学术研讨会[C].2008：112.

于艳萍（1978—），女，黑龙江省巴彦县人，硕士，高级兽医师，主要从事兽医工作。