高效液相色谱法测定耳聋左慈丸中毛蕊花糖苷含量

姜雪敏，杨立志

高效液相色谱法测定耳聋左慈丸中毛蕊花糖苷含量

姜雪敏，杨立志

（黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江鸡西 158100）

目的建立测定耳聋左慈丸中毛蕊花糖苷含量的高效液相色谱法。方法采用Agilent Extend－C18柱(250 mm×4.6 mm，5 m)，以乙腈－0.1%磷酸溶液（17∶83）为流动相，流速为1.0 mL／min，检测波长为334 nm，柱温为30℃。结果毛蕊花糖苷进样量在0.054 6～1.365 0 g内与峰面积积分值线性关系良好，r＝1.000 0（n＝6），平均回收率为96.86%，RSD为0.81%（n＝6）。结论该方法结果准确、简便、可靠，可用于耳聋左慈丸的质量控制。

毛蕊花糖苷；耳聋左慈丸；高效液相色谱法；含量测定

耳聋左慈丸是由磁石、熟地黄、山茱萸（制）、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻、竹叶柴胡制成的中成药，具有滋肾平肝功效，用于肝肾阴虚、耳鸣耳聋、头晕目眩[1]。方中熟地黄具有补血滋阴、益精填髓功效。目前，该药品的质量标准中尚未对熟地黄进行定性定量，而毛蕊花糖苷为熟地黄的活效成分。为完善其质量控制标准，本研究参考文献[2－16]，建立了高效液相色谱(HPLC)法测定耳聋左慈丸中毛蕊花糖苷含量的方法，并进行了方法学考察。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC－2010A型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；XSE－205DU型电子分析天平(瑞士梅特勒托利多公司)；KQ－400KDE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Extend－C18柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）；流动相：乙腈－0.1%磷酸溶液（17∶83）；流速：1.0 mL／min；柱温：30℃；进样量：10 μL；检测波长：334 nm。理论板数按毛蕊花糖苷峰计算不低于3 000。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液

称取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含毛蕊花糖苷54.60 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液

取本品研细，称取5.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇40 mL，加热回流30 min，放冷，滤过，蒸干，加流动相溶解，并定容至10 mL，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照品溶液

由于河流变化较小，具体更新方法是采用空间数据属性自动传递工具将1∶50 000 DLG数据中河流属性自动传递到1∶250 000 DLG数据相对应的河流上完成属性的自动更新。由于两套数据现势性不同、比例尺不同，在自动传递的过程中会造成一定的错误传递，所以自动传递后还需采用人工排查的方式对传递后的属性进行校对。另外，由于1∶250 000 DLG数据现势性较差，需要参照1∶50 000 DLG数据对重大自然环境变化导致河流改道，水利工程新建的大型沟渠、大型水库等进行逐一更新并进行综合处理。综合处理后的水系要注意协调与其他要素间的相互关系(特别是与等高线、公路的相互关系)。

按处方量并以相同工艺制备不含毛蕊花糖苷的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验：取2.2项下3种溶液，按拟订色谱条件进样测定，色谱图见图1。结果阴性对照品溶液色谱中，在毛蕊花糖苷色谱峰相应位置无干扰峰出现，表明阴性样品的其他组分对毛蕊花糖苷的测定无干扰。

线性关系考察：精密吸取毛蕊花糖苷对照品溶液1，2，5，10，15，25 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以毛蕊花糖苷进样量为横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程Y＝2.0000×106X－1.6825×102，r＝1.000 0（n＝6）。结果表明，毛蕊花糖苷进样量在0.054 6～1.365 0 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10 μL，连续进样6次，测定峰面积。结果峰面积的平均值为1021449，RSD为0.68%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于配制后0，4，8，12，16，20，24 h时依法进样测定。结果峰面积的平均值为246 265，RSD为0.82%（n＝7），表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取同一批（批号为150518）样品，分别依法制备6份供试品溶液并测定含量。结果毛蕊花糖苷平均含量为0.106 mg／g，RSD为1.05%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：称取已知含量的同一批（批号为150518，含量为0.106 mg／g）样品2.5 g，共6份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入0.26 g／mL毛蕊花糖苷对照品溶液0.8，1.0，1.2 mL，依法制备供试溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法测定。结果批号为150518，160204，150902的3批样品中，毛蕊花糖苷含量分别为0.106，0.092，0.108 mg／g。

表1 毛蕊花糖苷加样回收试验结果（n＝6）

3 讨论

3.1 测定波长选择

对毛蕊花糖苷对照品溶液在300～400 nm波长范围内进行光谱扫描，结果毛蕊花糖苷在334 nm波长处有最大吸收，灵敏度最高，故选择334 nm为测定波长。

3.2 流动相选择

考察了甲醇－水（20∶80）、甲醇－冰醋酸－水（60∶0.4∶39.6）、乙腈－0.1%磷酸溶液（17∶83）等不同的流动相系统，结果发现，采用乙腈－0.1%磷酸溶液（17∶83）为流动相时分离较好，且柱效较高，故选乙腈－0.1%磷酸溶液（17∶83）为流动相。

3.3 提取方法选择

考察了甲醇、80%甲醇、稀乙醇为提取溶剂时的提取效果，结果以甲醇为提取溶剂时毛蕊花糖苷含量明显高于后二者。本研究中还比较了回流0.5，1.0，1.5 h时的提取效果，结果表明回流0.5 h毛蕊花糖苷提取率与回流1.0 h和1.5 h的提取率基本相同，故选取回流0.5 h。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2015:823－824.

[2]边宝林，王宏杰，杨健.5种不同药材中毛蕊花糖苷的含量比较[J].中国中药杂志，2010，35(6):739－740.

[3]陈天朝，翟来超.HPLC同时测定地黄中梓醇与毛蕊花糖苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（5）：105－106.

[4]李文斌.HPLC法测定麦味地黄丸中毛蕊花糖苷的含量[J].中国药房，2014，25(28):2665－2667.

[5]丁丁，鲍佳妮，张振秋.HPLC法测定益精血合剂中毛蕊花糖苷含量[J].辽宁中医药大学学报，2015，17(5):75－76.

[6]吴竞妮.高效液相色谱法测定消郁舒心胶囊中毛蕊花糖苷含量[J].内蒙古中医药，2013，32(11):50.

[7]叶超，刘芳，陈宝龙，等.高效液相色谱法测定广藿香中毛蕊花糖苷的含量[J].中南药学，2014，12(12):1248－1250.

[8]王娟，汪选斌，李洪亮，等.HPLC法测定补肾化瘀浸膏中毛蕊花糖苷的含量[J].实用药物与临床，2015，18(9):1081－1083.

[9]臧文怡，毛春芹，苏晓楠，等.HPLC同时测定益经颗粒中芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷和斯皮诺素的含量[J].中国实验方剂学杂志，2016，22(5):60－63.

[10]赵群涛，张红伟，方永凯，等.HPLC法同时测定芪黄疏糖胶囊中梓醇和毛蕊花糖苷的含量[J].中华中医药学刊，2014，32(5):1200－1202.

[11]何洪伟，潘文波，何庆武，等.HPLC法测定清热解毒胶囊地黄中毛蕊花糖苷含量[J].江西中医药，2015，46(11):63.

[12]徐灿辉，何维为，何云飞，等.HPLC法测定六味地黄胶囊中的毛蕊花糖苷、马钱苷、芍药苷和丹皮酚[J].药物评价研究，2014，37(3):257－259.

[13]郭宏彦，涂禾，刘中均，等.HPLC法测定清热地黄酊中毛蕊花糖苷的含量[J].中国药房，2014，25(39):3703－3704.

[14]赵群涛，张红伟，方永凯，等.HPLC法同时测定芪黄疏糖胶囊中梓醇和毛蕊花糖苷的含量[J].中华中医药学刊，2014，32(5):1200－1202.

[15]蒙雄裕，徐良，李华强，等.用RP－HPLC法测定天目地黄中梓醇和毛蕊花糖苷的含量[J].药学服务与研究，2015，15(4):273－276.

[16]陈平，赵建东.高效液相色谱法测定补肾益脑胶囊中毛蕊花糖苷的含量[J].北方药学，2014，11(12):13.

Content Determination of Acteoside in Erlongzuoci Pills by HPLC

Jiang Xuemin,Yang Lizhi
(Jixi Center for Food and Drug Inspection and Testing,Jixi,Heilongjiang,China158100)

Objective To establish an HPLC methods for the content determination of acteoside in Erlongzuoci Pills.MethodsThe method was achieved on an Agilent Extend－C18column using acetonitrile－0.1%phosphoric acid(17∶83)as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL／min,and the detection wavelength was 334 nm.The column temperature was 30℃.ResultsQuercetin showed good linear relationship in the range of 0.054 6－1.365 0 μg,r＝1.000 0(n＝6),and the average recovery was 96.86%withRSD was 0.81%(n＝6).ConclusionThe method is accurate,simple,reliable and can be applied for the quality control of Erlongzuoci Pills.

acteoside;Erlongzuoci Pills;HPLC;content determination

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)01－0033－03

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.01.011

2016－10－01；

2016－11－27)

姜雪敏（1979－），女，大学本科，副主任药师，主要从事食品药品检验检测工作，（电子信箱）jiangxuemin88＠163.com。