一种稳定阿尔茨海默病细胞模型的建立方法

曹方圆， 罗德欣， 黄玉雕

一种稳定阿尔茨海默病细胞模型的建立方法

曹方圆1， 罗德欣2， 黄玉雕2

目的 旨在应用不同浓度Aβ1-42诱导新生SD大鼠海马神经元，建立稳定阿尔茨海默病细胞模型。方法 分离并培养新生24 h内SD大鼠原代海马神经细胞；分别加入不同浓度Aβ1-42诱导，诱导后采用MTT法观察细胞活力，选取理想Aβ1-42诱导的海马神经细胞作为阿尔茨海默病细胞模型；通过免疫荧光技术(IF)鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)在海马神经元细胞的表达。结果 Aβ1-42诱导后的海马神经细胞存活率下降，可导致海马神经元细胞胞体变形、收缩和细胞膜完整性破坏，胞间网络结构消失或断裂，细胞外基质乱不清，神经元大量凋亡；Aβ1-42诱导后的海马神经细胞存活率下降与Aβ1-42浓度成线性关系；加入不同浓度Aβ1-42(0 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L、40 μmol/L和50 μmol/L)后实验各组细胞存活率分别为(100.00±0.00)%、(98.55±1.42)%、(90.37±3.25)%，(66.34±2.76)%、(53.23±3.41)%和(41.55±2.37)%，其中20 μmol/L组与0 μmol/L组相比P<0.05，30 μmol/L、40 μmol/L和50 μmol/L组与对照组相比P<0.01。结论 Aβ1-42可导致海马神经元大量凋亡；Aβ1-42浓度为20 μmol/L诱导的SD大鼠海马神经元可作为理想的阿尔茨海默病细胞模型。

阿尔茨海默病； Aβ1-42； 海马神经元； 模型

阿尔茨海默病(AD)的病理学改变主要发生在基底节前脑核海马区胆碱能神经元，其典型的特征为老年斑、神经元缠结(neurofibrillary tangle，NFT)、突触缺失和神经元凋亡[1]。老年斑的早期病理学改变机制为细胞外淀粉样蛋白(amyloid β-protein，Aβ)沉积的结果，Aβ沉积后可激活小胶质细胞和星形胶质细胞发生炎症反应，从而老年斑块的周围可见活化的胶质细胞。AD发病时有较多且毒性强的Aβ1-42产生。本研究旨在应用不同浓度Aβ1-42诱导SD大鼠原代海马神经元建立稳定阿尔茨海默病细胞模型。为进一步从细胞分子水平研究AD提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康SD新生24 h内大鼠，体重约5～8 g，所有大鼠已通过哈尔滨医科大学动物管理委员会批准并由哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心提供。……