番茄沉默转基因植株的获得及功能初探

刘斯超+许涛+董秀芬+付欣+郑鹏靖+李兵

摘要：Aux/IAA（auxin/indole-3-acetic acid）作为生长素早期响应因子，其蛋白产物能够特异性地结合生长素响应因子（auxin response factor，ARF），从而调控生长素响应基因的表达，在整个植物生长素信号转导过程中发挥着重要的作用，进而影响植物的生长发育。本研究通过构建沉默载体，在高效遗传转化体系下获得转基因植株，发现利用Gateway克隆技术将番茄生长素早期响应基因 Domain Ⅱ区部分序列连入具有正反2个attr区域并连接1个内含子的pB7GWIWG2（Ⅰ）载体，可在植株体内形成发卡结构导致植物基因沉默，成功构建基因沉默表达载体名为SlIAA RNAi；此外，抗生素喷施和PCR扩增以及实时定量检测进一步鉴定，共获得12棵 RNAi阳性植株。本研究结果将为进一步明确SlIAA的生物学功能和阐明生长素的作用机理提供参考。

关键词：番茄；生长素；；载体构建；基因表达

中图分类号： Q785；Q786文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2017）05-0029-04

生长素（IAA）在植物的生长和发育中起着重要的作用，它不仅可以作用于细胞膜引起细胞的快速反应，而且还能够在分子水平上特异性地调控基因表达[1-2]。Aux/IAA作为生长素信号反应中的关键调控因子，已经在拟南芥、番茄等模式植物中进行了广泛的研究[3]。Aux/IAA基因属于多基因家族，目前在拟南芥中已发现有29个Aux/IAA家族基因，水稻和玉米中均有31个成员，黄瓜中有28个，棉花上有10个，马铃薯中有27个，苹果中有40个，草莓、高粱和番茄中有26个Aux/IAA家族成员[4-10]。

通过对拟南芥功能获得性突变体的研究，发现多数都是由Aux/IAA蛋白Domain Ⅱ核心区（VGWPP）的某个氨基酸的改变引起的，如Aux/IAA基因的突变会引起生长素反应因子（ARF）功能的紊乱，使植株出现生长素相关的异常表型，对生长素敏感性出现升高或降低