溃疡性结肠炎患者血清IL-23、IL-17水平变化与脾虚湿热证的相关性分析

杨 芳 葛桂萍 曹红艳 喻海中

(南京中医药大学附属南通市中医院,南通,226000)

溃疡性结肠炎患者血清IL-23、IL-17水平变化与脾虚湿热证的相关性分析

杨 芳 葛桂萍 曹红艳 喻海中

(南京中医药大学附属南通市中医院,南通,226000)

目的:观察细胞因子IL-23/IL-17在脾虚湿热型和非脾虚湿热型患者中的表达,探讨其与脾虚湿热型溃疡性结肠炎的关系。方法:选取2014年7月至2016年3月南通市中医院收治的溃疡性结肠炎患者60例,用ELLSA法检测30例脾热湿热型、30例非脾虚湿热型患者、20例健康人IL-23及IL-17水平,对所有受试对象进行脾虚湿热证型评分,分析IL-23及IL-17与脾虚湿热证的相关性。结果:脾虚湿热型和非脾虚湿热型溃疡性结肠炎组血清IL-23、IL-17水平明显升高,与健康者比较差异有统计学意义(P<0.05),脾虚湿热型和非脾虚湿热型之间比较,差异无统计学意(P>0.05);轻、中、重度溃疡性结肠炎患者血清IL-17、1L-23组间水平较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-23、IL-17与溃疡性结肠炎患者脾虚湿热证程度呈正相关。

溃疡性结肠炎;脾虚湿热;IL-23;IL-17

溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC),是一种临床上非常常见的慢性非特异性肠道炎性反应,在我国的发病率呈逐年上升趋势。目前其发病机制仍不明确;近年来,随着IL-23/IL-17通路的阐明,溃疡性结肠炎的发病机制有了深入研究。目前研究已证明,IL-23/IL-17通路可能是溃疡性结肠炎发病的重要免疫应答通路,它在慢性肠道炎性反应中可能处于重要地位[1]。我们通过长期的临床观察发现,脾虚湿热证在临床中较其他证型更多见,本课题旨在通过观察UC临床常见的脾虚湿热证患者血清IL-17、IL-23水平的测定,为活动期UC的诊断及脾虚湿热UC患者的辩、病情评估及未来中医药治疗提供可靠的客观理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年7月至2016年3月南通市中医院收治的住院患者中诊断为活动期UC患者60例,其中30例脾虚湿热证UC患者(脾虚湿热组),30例非脾虚湿热证UC患者(非脾虚湿热组),脾虚湿热组患者中男17例,女13例,年龄18～65岁,平均年龄(45.52±14.36)岁;病程0.5～30年,平均病程(8.17±9.36)年;30例非脾虚湿热组患者中,男15例,女15例;年龄18～64岁,平均年龄(43.56±14.89)岁;病程0.5～30年,平均病程(5.65±6.85)年。此外,选择本院健康体检者20例为正常对照组(健康组),其中男10例,女10例;年龄18～65岁,平均年龄(44.25±15.31)岁。经统计学分析,脾虚湿热组、非脾虚湿热组、健康组在年龄、性别等方面比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2 诊断标准 西医诊断标准采用《中国炎性反应性肠病诊断治疗规范的共识意见》(2007年山东济南会议),确定溃疡性结肠炎的诊断标准[2]。中医诊断标准参照国家标准《中医病证治法术语》制定,大瘕泻之脾虚湿热证:腹痛、腹胀、便中夹脓血,肛门灼热或有坠胀感,里急后重、身热、纳呆、神疲、乏力、面色少华,舌质红胖,舌苔黄滑、脉儒数,其中主症:大便夹有脓血伴腹痛腹胀,纳呆,神疲乏力、舌质红胖舌苔黄滑,次证:肛门灼热或坠胀感,里急后重、面色少华,脉儒数。溃疡性结肠炎疾病分度:轻度:患者每日腹泻4次以下,便血轻或无,无发热、脉搏加快或贫血,红细胞沉降率正常;中度:介于轻度和重度之间;重度:腹泻6次/d以上,伴明显黏液血便,体温>37.5 ℃,脉搏>90次/min,血红蛋白(Hb)<100 g/L,红细胞沉降率>30 mm/h。

1.3 纳入标准 半年之内做过肠镜,肠镜、病理及中医证型符合上述中西医诊断标准。

1.4 排除标准 病情程度为缓解期患者;细菌性痢疾、阿米巴痢疾、伪膜性肠炎、肠结核等感染性结肠炎;克罗恩病患者;缺血性肠炎、放射性肠炎患者;合并严重其他系统疾病患者。

1.5 剔除标准 不愿意配合此项临床研究的患者。

1.6 观察指标 脾虚湿热型和非脾虚湿热型患者血清IL-17、1L-23水平;溃疡性结肠炎患者疾病分级与血清IL-17、IL-23的关系;脾虚湿热证评分方法每个主症记2分,每个次症记1分。最高分12分,最低分4分。其余组最高分4分,最低分0分。所有溃疡性结肠炎患者在入院第2天抽取清晨空腹肘静脉血3 mL,对照组(体检健康者)在体检时抽取空腹肘静脉血3 mL,由南通市中医院化验室进行4 000 r/min离心,分离血清后于统一于-80 ℃冰箱贮存并统一检测。采用双抗体夹心(ELISA)法,检测程序按照试剂盒说明书进行。

2 结果

2.1 血清IL-17,IL-23比较 脾虚湿热型和非脾虚湿热型患者血清IL-17、1L-23水平较健康组明显升高(P<0.05),脾虚湿热型和非脾虚湿热型之间比较,差异无统计学意(P>0.05)。

表1 不同证型患者血清IL-17、1L-23水平

注:与健康人比较*P<0.05,**P<0.05。

2.2 溃疡性结肠炎患者疾病分级与血清IL-17、IL-23的关系 轻、中、重度溃疡性结肠炎患者血清IL-17、1L-23组间水平较差异有统计学意义(P<0.05)。

表2 轻、中、重度患者血清IL-17、IL-23水平

注:与轻度患者比较,*P<0.05,**P<0.05。

2.3 IL-17、IL-23与脾虚湿热证评分值的相关性 脾虚湿热型评分与IL-17、IL-23均呈正相关。见表3。

表3 IL-17、IL-23与脾虚湿热证评分值的相关性

3 讨论

中医理论根据溃疡性结肠炎的临床表现,可归于“泄泻、下利、痢疾、肠癖”等范畴。《黄帝内经》称为“濡泄”“洞泄”“注下”“后泄”“鹜溏”“飧泄”等,《诸病源侯论·痢病诸侯》中有赤白痢、血痢、脓血痢、热痢等名称;《备急千金药方·热痢》指出“大凡痢有四种,谓冷、热、疳、蛊:冷则白,热则赤,疳则赤白相杂……,蛊则纯痢瘀血”,并举有治赤白滞下方;《外台秘要·水谷痢》对痢之分型更多,列有治痢方剂170余首,其中重下方6首。该病的病因病机主要为饮食不节或者外感湿热之邪损伤脾胃,脾虚则运化失司,水湿内停,日久化热,湿热下注肠道,致肠道传导失司,脂络受伤,气滞血瘀,而致血败肉腐成脓而发生此病,可见脾虚是发病的根本,湿热是标,正如张景岳所云“凡痢疾,病在广肠最下端,而其病变不在广肠而在脾也,揭示了UC脾虚湿热证的本质。

目前研究发现溃疡性结肠炎的发病与遗传、肠黏膜屏障功能异常、肠黏膜免疫失调、肠道细菌紊乱等等多种机制有关,虽然致病的始动因素尚未确定,但持续存在的肠黏膜免疫失调仍然是溃疡性结肠炎发病的关键。随着对溃疡性结肠炎发病机制的不断深入,各种炎性反应细胞因子在UC的发病过程中起着重要作用,已有研究表明[3-4]认为IL-23/IL-17炎性反应轴IL-23/IL-17轴在肠道炎性反应中发挥重要。IL-23主要是由IL-12p40和IL-23p19,2个亚单位组成,其主要是由被激活的单核-巨噬细胞和树突状细胞所分泌。IL-23通过结合细胞膜表面分泌的IL-23受体复合物,从而刺激细胞内的信号传导系统,进而诱导细胞激活。IL-23在CD4+T等免疫细胞应答中起关键作用,其能刺激炎性反应细胞向病变部位聚集,从而诱导炎性反应肉芽肿形成。因此,近年来研究发现,IL-23在UC的发病中扮演了重要角色,在UC的发病中有着积极的免疫调节作用,这种作用是通过促进IL-17的分泌发挥的,IL-23是一种强烈的细胞免疫调节因子和刺激因子,它可以诱导记忆型的Th17细胞分泌大量IL-17。现阶段有研究证实,溃疡性结肠炎患者肠黏膜中IL-23含量较正常组对比,其含量明显升高[5-6]。随着溃疡性结肠炎疾病的进展,IL-23/IL-17免疫通路逐渐失调,自身组织和抗原的免疫耐受逐渐破坏,最终诱发了自身免疫性疾病的发生。

IL-17主要是由Th17细胞诱导、基质细胞产生的一种可溶性炎性反应细胞因子,能刺激内皮细胞、上皮细胞产生粒细胞集落刺激因子、IL-8、IL-6和PGE2等,并能促进血液中中性粒细胞发育成熟。有研究发现,溃疡性结肠炎患者血清IL-17的浓度水平与其病情呈现正相关,重度患者IL-17含量高于中度患者,中度患者IL-17含量又高于轻度患者,说明IL-17的表达水平与溃疡性结肠炎的炎性反应程度及疾病进展密切相关。溃疡性结肠炎患者结肠组织中IL-17表达明显增高,说明局部IL-17聚集,从而诱发了溃疡性结肠炎的发生[7-10],由此推断,阻断IL-17分泌可能成为治疗UC的一个新手段。其致病机制可能为IL-17通过刺激上皮细胞盒抗原递呈细胞产生TNF、IL-6、IL-8、IL-1等炎性反应因子,进而募集并激活大量中性粒细胞,大量的炎性反应因子迁移到结肠炎性反应部位而致溃疡性结肠炎的发生。

本次试验研究表明,UC组和健康对照组间比较差异有统计学意义(P<0.05);UC轻、中、重度患者血清IL-23、IL-17表达水平组兼比较差异有统计学意义,在脾虚湿热型与非脾虚湿热型UC组间,差异无统计学意义(P>0.05),这与南方医科大学中医药学院所研究的湿热型型和非湿热型溃疡性结肠炎组血清IL-17水平明显升高,与对照组比由统计学意义研究结果不一致。我们分析,第一,可能与溃疡性结肠炎患者脾虚湿热证及非脾虚湿热证患者的样本量过少有关,第二,溃疡性结肠炎患者本身疾病错综复杂,统一时期本身存在脾虚湿热,同时也存在瘀血阻络的证型,单一证型难以概括,同一患者不同时期表现的中医证型不同,早期可能为湿热下注,中期可能为脾虚湿热,后期发展成为脾肾阳虚,而且早、中、晚3期界限难以确定,单一的一个证型难以概括。但是Spesrman检验说明了IL-23/IL-17与脾虚湿热证呈现正相关,说明IL-23/IL-17与UC的疾病进程密切相关,与溃疡性结肠炎严重程度相关,且可能在UC的发病机制中发挥主要的作用。

综上所述,溃疡性结肠炎是一种由多种复杂因素介入的一种免疫性疾病,IL-23/IL-17的高表达参与了溃疡性结肠炎疾病进程中慢性炎性反应的形成,且两者的血清含量与脾虚湿热证有密切的相关性,为临床上我们运用健脾清热利湿剂治疗溃疡性结肠炎可提供理论依据,并可以作为评价药物疗效的指标参考。

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(2016-12-13收稿 责任编辑：王明)

Correlation Analysis Between Serum IL-23, IL-17 and Syndrome of Dampness-heat Due to Spleen Deficiency in Patients with Ulcerative Colitis

Yang Fang, Ge Guiping, Cao Hongyan, Yu Haizhong

(1NantongHospitalofTraditionalChineseMedicineAffiliatedtoNanjingUniversityofChineseMedicine,Nantong226000,China)

Objective:To observe the expression of cytokine IL-23/IL-17 in patients with and without syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency, and explore the relationship between patients with ulcerative colitis (UC) and syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency. Methods:In total, 60 cases of UC patients admitted in Nantong Hospital of Traditional Chinese Medicine from July 2014 to March 2016 were selected as the research subjects. ELLSA method was used to test the IL-23 and IL-17 levels of 30 patients with syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency, 30 patients without syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency, and 20 healthy people. The syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency of all research subjects was graded, and the correlation between IL-23 and IL-17 levels and syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency was analyzed. Results:The IL 23/IL-17 levels in patients with and without syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency increased significantly, and there was significant difference when compared with healthy subjects (P<0.05). There was no significant difference between patients with and without syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency (P>0.05). There were statistically significant differences in the serum IL-17/1L-23 levels among patients with mild, moderate and severe UC patients (P<0.05). Conclusion:There was positive correlation between IL-23 /IL17 and the severity of syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency.

Ulcerative colitis; Syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency; IL-23; IL-17

南通市青年基金项目(编号:WQ2014056)

杨芳(1984.08—)女,硕士研究生,主治医师,研究方向:中医药治疗脾胃疾病,E-mail:348296489@qq.om

R256.3

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.03.030