法氏囊活性肽BP5对鸭肝炎病毒灭活疫苗免疫效果的影响

闫婉婉+张巫凡+张聪+王臣

摘 要：本试验旨在研制具有良好免疫效果的免疫肽，通过将法氏囊活性肽BP5作为佐剂添加到油乳苗中免疫雏鸭，对免疫鸭体液免疫和细胞免疫指标的检测来评价其对鸭肝炎病毒油乳灭活苗免疫效果的影响。结果表明，BP5作为免疫佐剂能明显增强鸭肝炎病毒油乳灭活苗的体液免疫和细胞免疫应答，为进一步的研究奠定了基础。

关键词：法氏囊；活性五肽；鸭肝炎病毒；灭活疫苗；体液免疫；细胞免疫

鸭病毒性肝炎是一种由鸭肝炎病毒感染导致的急性和高度致死性传染病，病死率达100%。疫苗接种是预防本病的有效措施，但目前使用的油乳灭活苗仅能诱导机体的体液免疫应答而不能有效刺激细胞免疫应答。因此研制与开发新型免疫增强剂成为当前家禽养殖业发展的当务之急。法氏囊活性五肽（BP5）是法氏囊中分离出来的一种新型活性小肽，能同时促进T、B淋巴细胞的增殖，不但能提高机体体液免疫和细胞免疫，还能平衡Th1和Th2类型免疫反應。而且它的免疫平衡作用是一般免疫增强剂所不具备的。本研究通过将法氏囊活性五肽作为免疫佐剂添加到鸭肝炎病毒油乳灭活苗中对雏鸭进行免疫，然后通过指标的测定来评价法氏囊活性肽对油苗免疫效果的影响，为开发一种新型免疫增强剂提供实验依据。

一、材料与方法

1.试验材料

法氏囊活性五肽，由西安华辰科技有限公司合成，纯度达95%；健康非免疫雏鸭35只，购于洛阳首阳山鑫科畜禽养殖合作社；实验兔2只，购于孙旗屯。

2.肽的设计及合成

法氏囊活性肽BP5根据已报道的序列（Cys-Lys-Asp-Val-Tyr），由西安华辰科技有限公司合成，纯度达95%。

3.动物分组与免疫

将35只鸭分为三组：空白组（5只）、疫苗组（15只）、疫苗+法氏囊活性五肽组（15只）。再将每组动物的免疫剂量设置三个梯度，每个梯度5只鸭。分别为：空白组；疫苗组：0.2 mL，0.5 mL，0.8 mL油乳灭活苗；疫苗+BP5组：0.2 mL疫苗+100 ug BP5，0.5 mL疫苗+100 ug BP5，0.8 mL疫苗+100 ug BP5。做好标记，采取肌肉注射。待首免后两周后进行二次免疫。采集鸭血100 mL，提取血清中的IgG来免疫兔子，在0 d进行首免，14 d进行二免。首免后21 d采集兔血50 mL，提取血清于-20°C冰箱内保存备用。

4.疫苗免疫后鸭血清中抗体的ELISA检测

采集首免后7 d、14 d、21 d鸭血液，分离血清进行血清中抗体效价检测。

5.疫苗免疫后鸭细胞免疫效果的检测

T细胞E玫瑰花环试验：分离淋巴细胞和制备红细胞悬液，制片并观察。镜下淋巴细胞呈蓝紫色或淡蓝色，绵羊血红细胞为无色，围绕淋巴细胞形成花环。

二、结果与分析

1.免疫鸭血清中抗体水平的动态分析

鸭经疫苗首免后，疫苗组和佐剂组与对照组相比均有鸭肝炎病毒抗体的产生，疫苗+ BP5组产生抗体水平均高于疫苗组。其中疫苗+佐剂组中0.5 mL剂量的免疫效果最好，0.8 mL剂量的免疫效果其次，0.2 mL剂量的免疫效果最差，说明佐剂不但有增强疫苗的免疫效果的作用，而且免疫效果与疫苗的用量有关。

2.免疫鸭T细胞E玫瑰花环结果

疫苗加佐剂组与单独疫苗组相比E玫瑰花环的形成率显著增高，而且BP5配合中等剂量的灭活苗免疫，细胞免疫水平最高。

三、讨论

鉴于法氏囊活性肽具有免疫佐剂的潜能，本研究通过人工合成法氏囊活性五肽，并将其作为佐剂添加到鸭肝炎病毒灭活疫苗中，通过固定法氏囊五肽的添加量，设置不同的疫苗免疫量来免疫雏鸭根据免疫指标显示，随着免疫的加强，疫苗+ BP5体液中抗体的水平呈均上升趋势，OD405值均比相对应的疫苗组显著增高；淋巴细胞形成率与单独疫苗组相比提高显著，这表明法氏囊活性五肽作为佐剂能显著提高鸭肝炎病毒灭活疫苗的体液免疫和细胞免疫应答，为法氏囊活性五肽作为免疫佐剂配合灭活疫苗使用提供了参考依据。

参考文献：

[1] 杨汉春.动物免疫学（第二版）（M）.北京：中国农业大学出版社，2003.8.

[2] 张秀根，蒋贻海，范根成，等.法氏囊活性肽对新城疫油乳剂灭活苗免疫效果的初步研究[J].中国兽医杂志，1998，24（ 11） ：48- 49.

作者简介：闫婉婉（1996- ），女，河南焦作人，本科学历。

王臣（1979-），男，安徽六安人，博士学历，副教授，研究方向：动物分子病原学与免疫学。