慢性丙型肝炎肝硬化患者外周血辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞及相关因子检测的临床意义

郭飞波， 武军驻， 艾黎明， 宋 瑛

(湖北省天门市第一人民医院 检验科， 湖北 天门 431700)

慢性丙型肝炎肝硬化患者外周血辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞及相关因子检测的临床意义

郭飞波， 武军驻， 艾黎明， 宋 瑛

(湖北省天门市第一人民医院 检验科， 湖北 天门 431700)

目的 探讨丙型肝炎肝硬化(CHC-LC)患者外周血Th17/Treg失衡及其相关细胞因子变化的临床意义。方法 收集2014年5月-2016年5月于天门市第一人民医院就诊的CHC患者96例，其中CHC患者54例(CHC组)、CHC-LC患者42例(LC组)、健康体检者40例(HC组)。采用流式细胞术检测3组的外周血Th17/Treg细胞表达情况，采用ELISA法检测血清IL-6、IL-10、IL-17及TGFβ，同时检测HCV RNA、AST、ALT、TBil。多组比较采用方差分析,进一步两组间比较采用SNK-q检验；计数资料组间比较采用χ2检验；相关性分析采用Pearson相关性分析法。结果 LC组的外周血Th17细胞比率[(5.97±0.84)%]、Treg细胞比率[(3.14±0.72)%]、Th17/Treg(1.90±0.52)均显著高于HC组[(2.39±0.46)%、(1.72±0.53)%、(1.39±0.12)]和CHC组[(4.75±0.67)%、(2.81±0.87)%、(1.69±0.45)]，差异均有统计学意义(F值分别为312.95、47.21、17.34，P值均<0.001)。LC组的各细胞因子IL-6、IL-17、IL-10及TGFβ均显著高于HC组和CHC组，差异均有统计学意义(F值分别为160.38、574.11、23.90、36.97，P值均<0.001)。Th17细胞比率、Treg细胞比率、Th17/Treg及各细胞因子(IL-17、IL-6、IL-10、TGFβ)与ALT、AST呈显著正相关性(ALT：r值分别为0.633、0.525、0.631、0.931、0.841、0.372、0.343，P值均<0.05；AST：r值分别为0.597、0.502、0.564、0.873、0.813、0.365、0.337，P值均<0.05)，Th17细胞比率、Treg细胞比率、IL-6、IL-17、TGFβ与TBil均呈显著正相关性(r值分别为0.344、0.231、0.401、0.339、0.307，P值均<0.05)。结论 Th17/Treg细胞及相关因子可能与CHC及LC的发生发展密切相关，Th17/Treg及其相关细胞因子检测可能对CHC-LC的防治具有重要意义。

肝炎, 丙型, 慢性； 肝硬化； T淋巴细胞, 调节性； T淋巴细胞, 辅助诱导； 细胞因子类

HCV感染是全球重大卫生问题之一，HCV急性感染后有70%～80%可发展成为慢性丙型肝炎(CHC)，其中20%左右可发展成为肝硬化(LC)与肝细胞癌(HCC)[1-2]。HCV所致LC的发生机制目前尚不完全明确，部分学者认为与免疫损伤所致HCV感染慢性化密切相关。辅助性T淋巴细胞17(Th17)与调节性T淋巴细胞(Treg)作为两类新型T淋巴细胞亚群，分别具有促炎及抗炎作用，研究[3-4]表明Th17/Treg失衡及其细胞分子可能导致肝脏免疫炎症加重或加速肝炎病毒感染慢性化。但关于Th17/Treg平衡及其细胞因子在HCV感染慢性化尤其是在HCV-LC进程中的作用研究报道尚少，且研究结论不一致。本研究检测分析了CHC及LC的外周血Th17/Treg平衡及其细胞因子，旨在从细胞免疫以及细胞因子的微观角度探析HCV-LC的发病机制，为阻断CHC及LC进程提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择2014年5月-2016年5月本院收治的CHC患者96例，其中单纯CHC患者54例(CHC组)，CHC相关LC患者42例(LC组)。同期健康体检者40例为对照(HC组)。纳入标准:(1)符合《丙型肝炎防治指南》[5]诊断标准；(2)明确诊断为LC，肝功能Child-Pugh评分≥7分；(3)年龄18～75岁；(4)受试者自愿参与本试验，签署知情同意书。排除标准:(1)HAV、HBV、HDV及HIV等其他病毒感染者；(2)自身免疫性肝炎、酒精性肝炎等非病毒性肝炎、肝损伤者；(3)具有恶性肿瘤、甲状腺疾病、严重心肺疾病、肾脏病变、糖尿病、HCC及神经疾病病史者；(4)妊娠期、哺乳期妇女。

1.2 仪器与试剂 主要仪器：流式细胞仪、全自动酶免分析仪均为美国Beckman公司生产，酶标仪为意大利SEAC公司生产，全自动电化学发光仪为美国Abbott公司生产。主要试剂：Th17及CD4+CD25+Foxp3+Treg一步法流式检测试剂盒均为美国Biolegend公司生产；离子霉素、佛波酯及莫能菌素均由美国eBioscience公司生产；人IL-6、IL-10、IL-17及TGFβ ELISA试剂盒均由美国Market公司生产；生化检测试剂均由美国Beckman公司生产。

1.3 实验方法

1.3.1 血液标本采集 受试者均隔夜空腹>8 h后于次日早晨8∶00-9∶00采集静脉血2管，1管5 ml以肝素钠抗凝，另一管5 ml于3000 r/min(离心半径10.5 cm)离心10 min，留取血清保存于-80 ℃冰箱中，2 h内完成检测。

1.3.2 Th17/Treg细胞检测

1.3.2.1 Th17表达检测 取300 μl抗凝血标本加入等体积PBS稀释，以Ficoll密度梯度离心法获取外周血单个核细胞，加PRMI悬液2 ml将细胞浓度调整至2×106个/ml，常规接种至24孔培养板上，依次加入蛋白酶抑制剂0.8 μl、离子霉素(1 μg/ml)1.2 μl、佛波酯(50 ng/ml)1.2 μl，置于37 ℃、5%CO2恒温箱中连续培养4～6 h。收集细胞后等分为测定管与对照管，分别加入CD8-PE单抗20μl及CD3-PC5单抗10μl，充分混匀后避光保存15 min。加入200 μl破膜固定剂A液，充分混匀后避光保存15 min，加入PBS 3ml，于1500 r/min(离心半径15 cm)离心5 min，弃去上清液。加入破膜固定剂B液200 μl，测定管与对照管分别加入20 μl IL-17A-PE与同型对照，避光于室温下孵育30 min，加入3 ml PBS，离心5 min留取下层细胞。加入0.5 ml PBS重悬，上机测定Th17，以CD3+CD8-设门确定Th17(CD3+CD8-IL-17+)比例。

1.3.2.2 Treg表达检测 取100 μl抗凝血标本，加入CD25-PCy7单抗、CD4-FITC单抗以及CD127-PE单抗各10 μl，在37 ℃下避光孵育15 min；然后加入1.5 ml红细胞裂解液，适度振荡混匀，在室温避光条件下保存10 min，于1500 r/min(离心半径15 cm)离心5 min，弃去上清液；再加入PBS 1.5 ml，充分混匀后再次离心，重复1次；加入PBS 0.5 ml重悬细胞，上机检测Treg，以CD4+CD25+CD127-/low设门确定Treg细胞比例。

1.3.3 HCV RNA及细胞因子检测 采用高敏HCV DNA PCR试剂盒(PCR-荧光探针法)测定血清HCV RNA滴度，采用ELISA法检测血清IL-6、IL-10、IL-17及TGFβ。

1.3.4 肝功能指标检测 采用全自动化学免疫分析仪测定血清AST、ALT以及TBil。

2 结果

2.1 一般资料 CHC组中男37例，女17例，年龄25～75岁，平均(50.34±10.21)岁。LC组中男27例，女15例，年龄24～75岁，平均(51.12±8.43)岁。HC组中男23例，女17例，年龄20～75岁，平均(49.12±7.96)岁。3组年龄、性别比较差异均无统计学意义(F值分别为1.213、1.162；P值分别为0.545、0.451)。

2.2 3组ALT、AST、TBil及HCV DNA水平比较 3组ALT、AST、TBil及HCV RNA水平比较差异均有统计学意义(P值均<0.001)。2组间进一步比较结果提示HC组ALT、AST、TBil以及HCV RNA水平最低，其次是CHC组，最后为LC组(表1)。

表1 3组ALT、AST、TBil及HCV DNA水平比较

注：与HC组比较，1)P<0.05；与CHC组比较，2)P<0.05

2.3 3组外周血Th17/Treg表达比率比较 3组的Th17细胞比率、Treg细胞比率、Th17/Treg比值比较差异均有统计学意义(P值均<0.001)。2组间进一步比较提示HC组Th17、Treg、Th17/Treg比值最低，其次是CHC组，最后为LC组(表2和图1，2)。

表2 3组外周血Th17/Treg表达率比较

注：与HC组比较，1)P<0.05；与CHC组比较，2)P<0.05

图1 3组外周血Th17细胞亚群流式图

图2 3组外周血Treg细胞亚群流式图

2.4 3组血清细胞因子水平比较 3组的IL-6、IL-17、IL-10及TGF β比较差异均有统计学意义(P值均<0.001)。2组间进一步比较提示HC组IL-6、IL-17、IL-10及TGFβ最低，其次是CHC组，最后为LC组(表3)。

表3 3组血清细胞因子水平比较

注：与HC组比较，1)P<0.05；与CHC组比较，2)P<0.05

2.5 Th17/Treg及相关因子与肝功能指标间的相关性 Th17细胞比率、Treg细胞比率、Th17/Treg及各细胞因子均与ALT、AST呈显著正相关性(P值均<0.05)；Th17细胞比率、Treg细胞比率、IL-6、 IL-17、TGFβ与TBil均呈显著正相关性(P值均<0.05)(表4)。

表4 Th17/Treg及相关因子与肝功能指标间的相关性

3 讨论

HCV感染后慢性化的机制目前尚不完全明确，普遍认为HCV并不直接导致肝细胞损伤，而是由免疫介导炎症反应而损伤肝细胞。Th细胞亚群及其细胞因子网络失衡是当前公认的肝炎病毒感染致病的主要机制，既往多集中于CD4+T淋巴细胞Th1/Th2平衡紊乱方面，而新近研究[6]发现，CD4+T淋巴细胞还可分化出Th17及Treg。Th17激活能够分泌IL-6、IL-17、IL-21、IL-22及TNFα等细胞因子，主要介导炎症反应；Terg能够分泌出IL-4、IL-10以及TGFβ等，主要调节机体免疫耐受，从而维持机体免疫豁免[7-8]。已有研究[9]证实，Th17细胞、Treg细胞在肝炎病毒感染慢性化进程中具有重要作用。但目前关于Th17/Treg平衡及其相关因子在HCV感染慢性化及LC发生中的作用机制尚不明确。

本研究结果显示，CHC组及LC组的外周血Th17及Treg表达率均较HC组显著升高，且LC组显著高于CHC组，推测HCV感染后，随着病情进展Th17及Treg被激活，外周血中Th17及Treg明显增加。由于HCV感染后肝实质细胞合成并释放出大量胸腺基质淋巴细胞生成素，从而刺激Th17分化增殖，Th17能够分泌出IL-17而抑制肝细胞的凋亡，从而使得感染HCV肝细胞存活，进而导致HCV感染慢性化[10-12]。从理论角度而言，Treg增多有利于增强机体免疫应答，促进HCV的清除，限制肝纤维化扩散。但Treg能够与IL-10、TGFβ等多细胞因子共同作用抑制HCV特异性T淋巴细胞的增殖，进而诱导HCV感染慢性化[13]。有研究[14-15]显示，CHC患者的外周血Treg比例明显高于健康对照组，且经抗病毒治疗获得持续病毒学应答者外周血Treg比例明显下降。推测HCV感染后外周血Th17及Treg表达均有不同程度的升高，而在疾病慢性化进程中，Th17/Treg细胞平衡关系可能存在动态演变。本研究中，CHC组及LC组的Th17/Treg比值也相应升高，LC组明显高于CHC组，表明CHC及LC患者具有明显的Th17及Treg表达升高，但Th17的增加比例优于Treg，导致Th17/Treg失衡，造成Th17处于相对优势而Treg相对缺乏，进而加速或加重CHC肝脏免疫炎症的发生及发展，与孙丽杰等[16]研究所示CHC患者的外周血Treg/Th17细胞比例较健康正常人明显升高不一致，但与鼠模型研究[17]中Treg能够预防肝纤维化进程及限制肝纤维化程度、降低IL-17则可减轻肝纤维化基本一致。此外，CHC患者的Th17细胞比率、Treg细胞比率、Th17/Treg比值均与ALT、AST水平呈显著正相关性。Chang等[18]研究发现，在CHC患者中随着病情进展，其肝内Th17数量将呈现持续增加趋势，且与血清病毒载量、转氨酶水平及肝脏炎症程度之间呈现显著相关性；娄鸣等[19]研究显示，外周血Th17细胞频率及其细胞因子IL-17与肝炎后肝硬化的病情严重程度呈现显著正相关性。上述研究结论与本研究基本一致，进一步证实Th17/Terg失衡在CHC肝损伤及LC发生中具有重要作用，Th17过度分化可能导致肝细胞免疫损伤加重，而Treg反应性升高又将导致HCV免疫清除受抑，形成不可逆性肝损伤。

CHC相关LC的形成不仅与Th17/Treg失衡有关，同时还与肝组织免疫炎症反应密切相关。TGFβ作用可诱导肝星状细胞(HSC)分泌出多种细胞外基质(ECM)，大量ECM沉淀于肝脏内可引起肝脏结构及功能异常表现，进而表现为肝纤维化以及LC[20-21]。Treg能够分泌出TGFβ而刺激ECM的分泌并诱导Treg分化，进而导致HCV感染慢性化及LC的发生及发展[22-23]。此外，Th17能够分泌出特征性细胞因子IL-17，直接作用于HSC表面分布的IL-17R，从而激活HSC并分泌出更多的IL-6等，进而上调TNFα及TGFβ等的表达。TGFβ与IL-6共同作用是促使Th17分化的必要因素，且Th17的分化作用与Treg的诱导作用之间呈现相互排斥关系[24]。Treg分泌的IL-10能够负性调节中性粒细胞而减轻肝细胞损伤，但其同时也可抑制Th1免疫，从而导致HCV感染慢性化。本研究中，CHC组及LC组的血清IL-17、IL-6、IL-10及TGFβ均显著高于HC组，且LC组显著高于CHC组(P<0.05)，与孙鹥等[25]报道基本一致。研究还发现，IL-17、IL-6、IL-10及TGFβ均与ALT、AST呈显著正相关性，除IL-10外其余指标均与TBil呈显著正相关性，进一步证实LC患者具有明显的Th17/Treg失衡，而免疫重心侧重于Th17，血清IL-17、IL-6、IL-10及TGFβ水平升高可能与HCV感染慢性化及LC的发生密切相关。

综上所述，Th17和Treg细胞平衡是维持机体免疫稳态的关键，本研究证实Th17和Treg细胞及相关因子在HCV慢性化及LC发生中具有促进作用，无论是早期诊断亦或肝病防治，Th17/Treg细胞平衡及其细胞因子检测对于CHC及LC均具有重大意义。

[1] WU Q, MENG FP, MA XM, et al. Analysis of association between different HCV genotypes and serum interleukin-17, interleukin-6, and vitamin D in patients with HCV-related cirrhosis[J]. J Clin Hepatol, 2015, 31(11): 1849-1852.(in Chinese) 吴勤, 孟繁平, 马雪梅， 等.丙型肝炎肝硬化患者HCV基因型与血清白细胞介素17、白细胞介素6及维生素D的关系[J]. 临床肝胆病杂志, 2015, 31(11): 1849-1852.

[2] COSTANTINI S, CAPONE F, MAIO P, et al. Cancer biomarker profiling in patients with chronic hepatitis C virus, liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma[J]. Oncol Rep, 2013, 29(6): 2163-2168.

[3] SUN XF, SHI ZQ, XU Q, et al. Role of the balance Th17/Treg in liver fibrosis[J/CD]. Chin J Clinicians: Electronic Edition, 2012, 6(24): 8243-8244. (in Chinese) 孙晓飞, 施志强, 徐庆, 等. Th17/Treg平衡在肝纤维化中的作用[J/CD]. 中华临床医师杂志: 电子版, 2012, 6(24): 8243-8244.

[4] CHEN Y, FANG JK, CHEN XZ, et al. Effects of the Treg/Th17 cell balance and their associated cytokines in patients with hepatitis B infection[J]. Exp Ther Med, 2015, 9(2): 573-578.

[5] Chinese Society of Hepatology and Chinese Society of Infectious Diseases, Chinese Medical association. The guideline of prevention and treatment for hepatitis C: a 2015 update[J]. J Clin Hepatol, 2015, 31(12): 1961-1979. (in Chinese) 中华医学会肝病学分会， 中华医学会感染病学分会. 丙型肝炎防治指南(2015年更新版)[J]. 临床肝胆病杂志, 2015, 31(12): 1961-1979.

[6] SILVA LD, ROCHA AM, ROCHA GA, et al. The presence of Helicobacter pylori in the liver depends on the Th1, Th17 and Treg cytokine profile of the patient[J]. Mem Inst Oswaldo Cruz, 2011, 106(6): 748-754.

[7] SU ZJ, YU XP, GUO RY, et al. Changes in the balance between Treg and Th17 cells in patients with chronic hepatitis B[J]. Diagn Micr Infec Dis, 2013, 76(4): 437-444.

[8] HAMMERICH L, HEYMANN F, TACKE F. Role of IL-17 and Th17 cells in liver diseases[J]. Clin Dev Immunol, 2011, 2011(1): 184-186.

[9] LIN ZZ, YU XP, SU ZJ, et al. Detection of the ratios of Treg/Th17 and study on its correlation with liver function in peripheral blood of patients with chronic hepatitis B[J]. Chin J Immunol, 2012, 28(11): 1036-1040. (in Chinese) 林振忠, 余雪平, 苏智军, 等. 慢性乙型肝炎患者外周血Treg/Th17比率的检测及其与肝功能的相关性研究[J]. 中国免疫学杂志, 2012, 28(11): 1036-1040.

[10] LIU HE, YOU J, CHEN HY, et al. Study on the role of the balance Th17/Treg in the development of hepatitis B virus - related Liver Fibrosis[J]. Chin Gen Prac, 2016, 19(18): 2121-2125. (in Chinese) 刘怀鄂, 游晶, 陈红英, 等. 辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞平衡在乙型肝炎病毒感染相关肝脏疾病进展中的作用研究[J]. 中国全科医学, 2016, 19(18): 2121-2125.

[11] CHEN XY, ZHANG YH, MA LN, et al. Changes in NK cells and regulatory T cells among patients with refractory chronic hepatitis C during antiviral treatment[J]. J Clin Hepatol, 2014, 30(6): 508-513. (in Chinese) 陈晓云, 张永宏, 马丽娜, 等. 难治性慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗中NK细胞和Treg细胞的动态变化[J]. 临床肝胆病杂志, 2014, 30(6): 508-513.

[12] CLAASSENL MA, de KNEGT RJ, TILANUS HW, et al. Abundant numbers of regulatory T cells localize to the liver of chronic hepatitis C infected patients and limit the extent of fibrosis[J]. J Hepatol, 2010, 52(3): 315-321.

[13] TSENG KC, HO YC, HSIEH YH, et al. Elevated frequency and function of regulatory T cells in patients with active chronic hepatitis C[J]. J Gastroenterol, 2012, 47(7): 823-833.

[14] LI ZQ, GU XY, PING Y, et al. Dynamic changes of regulatory T cells and their inhibitory molecules during antiviral treatment in patients with chronic hepatitis C[J]. Chin J Infect Dis, 2016, 34(6): 332-336. (in Chinese) 李志勤, 顾心雨, 平玉, 等. 慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗后调节性T淋巴细胞及其表面免疫抑制分子的动态变化[J]. 中华传染病杂志, 2016, 34(6): 332-336.

[15] YAO JH. Correlation of regulatory B cells and regulatory T cells in patients with chronic hepatitis C[J]. Chin J Prim Med Pharm, 2016, 23(2): 275-277. (in Chinese) 姚建华. 慢性丙型肝炎患者调节性B细胞的表达及其与调节性T细胞的相互关系研究[J]. 中国基层医药, 2016, 23(2): 275-277.

[16] SUN LJ, YU JW, LIU W, et al. The impact of antiviral therapy on the ratio of regulatory T cells and Th17 cells in patients with chronic hepatitis C[J]. Chin Hepatol, 2012, 17(1): 21-24. (in Chinese) 孙丽杰, 于建武, 刘伟, 等. 抗病毒治疗对慢性丙型肝炎患者Treg/Th17细胞比例变化的影响[J]. 肝脏, 2012, 17(1): 21-24.

[17] NUNOYA J, WASHBURN ML, KOVALEV GI, et al. Regulatory T cells prevent liver fibrosis during HIV type 1 infection in a humanized mouse model[J]. J Infect Dis, 2014, 209(7): 1039-1044.

[18] CHANG Q, WANG YK, ZHAO Q, et al. Th17 cells are increased with severity of liver inflammation in patients with chronic hepatitis C[J]. J Gastroenterol Hepatol, 2012, 27(2): 273-278.

[19] LOU M, YOU J, LIU HE, et al. Changes of peripheral Th17 and Treg and Th17/Treg balance in patients with chronic hepatitis B virus infection[J]. Chin Gen Prac, 2016, 19(18): 2115-2120. (in Chinese) 娄鸣, 游晶, 刘怀鄂, 等. 慢性乙型肝炎病毒感染者外周血辅助性 T 淋巴细胞17和调节性 T 淋巴细胞的变化及二者平衡的研究[J]. 中国全科医学, 2016, 19(18): 2115-2120.

[20] WANG GQ, WANG XF, WANG L, et al. Changes and significance of Th17 and Treg cells as well as their associated cytokines in peripheral blood of patients with chronic hepatitis C and cirrhosis[J]. Chin J Immunol, 2016, 32(6): 882-886. (in Chinese) 王国戗, 王小方, 汪磊, 等. Th17和Treg细胞以及其相关细胞因子在慢性丙型肝炎以及丙型肝炎肝硬化病人外周血中的变化及意义[J]. 中国免疫学杂志, 2016, 32(6): 882-886.

[21] D′ARGENIO G, MAZZONE G, RIBECCO MT, et al. Garlic extract attenuating rat liver fibrosis by inhibiting TGF-β1[J]. Clin Nutr, 2013, 32(2): 252-258.

[22] GOTO K, LIN W, ZHANG L, et al. The AMPK-related kinase SNARK regulates hepatitis C virus replication and pathogenesis through enhancement of TGF-β signaling[J]. J Hepatol, 2013, 59(5): 942-948.

[23] HAO C, ZHOU Y, HE Y, et al. Imbalance of regulatory T cells and T helper type 17 cells in patients with chronic hepatitis C[J]. Immunology, 2014, 143(4): 531-538.

[24] ZHENG S, NING Z. Therapeutic effect of CD4+CD25+regulatory T cells and transforming growth factor beta-1 on patients with hepatocellular carcinoma[J/CD]. Chin J Liver Dis： Electronic Edition, 2012, 4(4): 9-12. (in Chinese) 郑盛, 宁珠. 原发性肝癌患者CD4CD25调节性T细胞及转化生长因子β1检测[J/CD]. 中国肝脏病杂志: 电子版, 2012, 4(4): 9-12.

[25] SUN Y, HUANG R, NIU H, et al. Clinical significance of Th17-associated cytokines in patients with hepatitis C[J]. J Kunming Med Univ, 2014, 35(8): 63-66. (in Chinese) 孙鹥, 黄蓉, 牛华, 等. Th17相关细胞因子在丙型肝炎患者血清中的变化及意义[J]. 昆明医科大学学报, 2014, 35(8): 63-66.

引证本文：GUO FB, WU JZ, AI LM, et al. Clinical significance of Th17/Treg and associated cytokines in peripheral blood in chronic hepatitis C patients with liver cirrhosis[J]. J Clin Hepatol, 2017, 33(3): 479-484. (in Chinese)

郭飞波， 武军驻， 艾黎明， 等. 慢性丙型肝炎肝硬化患者外周血辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞及相关因子检测的临床意义[J]. 临床肝胆病杂志, 2017, 33(3): 479-484.

(本文编辑：刘晓红)

Clinical significance of Th17/Treg and associated cytokines in peripheral blood in chronic hepatitis C patients with liver cirrhosis

GUOFeibo,WUJunzhu,AILiming,etal.

(DepartmentofClinicalLaboratory,TheFirstPeople′sHospitalofTianmen,Tianmen,Hubei431700,China)

Objective To investigate the clinical significance of Th17/Treg imbalance and changes in associated cytokines in chronic hepatitis C (CHC) patients with liver cirrhosis. Methods A total of 96 CHC patients who visited The First People′s Hospital of Tianmen from May 2014 to May 2016 were enrolled and divided into CHC group with 54 CHC patients, LC group with 42 CHC patients with LC, and HC group with 40 healthy persons who underwent physical examination. Flow cytometry was used to measure the percentages of Th17 and Treg cells in peripheral blood, ELISA was used to measure the serum levels of interleukin-6 (IL-6), interleukin-10 (IL-10), interleukin-17 (IL-17), and transforming growth factor-β (TGFβ), and the levels of HCV RNA, aspartate transaminase (AST), alanine aminotransferase (ALT), and total bilirubin (TBil) were also measured. An analysis of variance was used for comparison between multiple groups, and the SNK-qtest was used for comparison between any two groups; the chi-square test was used for comparison of categorical data between groups; Pearson correlation analysis was also performed. Results Compared with the HC group and the CHC group, the LC group had significantly higher percentages of Th17 cells (5.97%±0.84% vs 2.39%±0.46%/4.75%±0.67%,F=312.95,P<0.001) and Treg cells (3.14%±0.72% vs 1.72%±0.53%/2.81%±0.87%,F=47.21,P<0.001) in peripheral blood, as well as a significantly higher Th17/Treg ratio (1.90±0.52 vs 1.39±0.12/1.69±0.45,F=17.34,P<0.001). The LC group also had significantly higher serum levels of IL-6, IL-17, IL-10, and TGF-β than the HC group and the CHC group (F=160.38, 574.11, 23.90, and 36.97, allP<0.001). The percentages of Th17 and Treg cells, Th17/Treg ratio, and levels of IL-17, IL-6, IL-10, and TGF-β were significantly positively correlated with ALT and AST levels (ALT:r=0.633, 0.525, 0.631, 0.931, 0.841, 0.372, and 0.343, allP<0.05; AST:r=0.597, 0.502, 0.564, 0.873, 0.813, 0.365, and 0.337, allP<0.05), and the percentages of Th17 and Treg cells and levels of IL-6, IL-17, and TGFβ were also significantly positively correlated with TBil level (r=0.344, 0.231, 0.401, 0.339, and 0.307, allP<0.05). Conclusion Th17 and Treg cells and associated cytokines may be closely associated with the development and progression of CHC and LC and have certain significance in the prevention and treatment of CHC patients with LC.

hepatitis C， chronic; liver cirrhosis; T-lymphocytes, regulatory; T-lymphocytes, helper-inducer; cytokines

10.3969/j.issn.1001-5256.2017.03.017

2016-09-23；

2016-11-09。

武汉市卫计委支持项目(2014B095)

郭飞波(1980-)，男，主管技师，主要从事病毒免疫与分子病毒学研究。

R512.63; R575.2

A

1001-5256(2017)03-0479-06