心肌Cav1.2钙通道NT片段的提取纯化及其与CaM的相互作用

苏敬阳，邵冬雪，雷明，康泽，赵君，方涵田，郭凤，赵美眯，郝丽英，封瑞

（中国医科大学药学院药物毒理学教研室，沈阳110122）

心肌Cav1.2钙通道NT片段的提取纯化及其与CaM的相互作用

苏敬阳，邵冬雪，雷明，康泽，赵君，方涵田，郭凤，赵美眯，郝丽英，封瑞

（中国医科大学药学院药物毒理学教研室，沈阳110122）

目的探讨心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段提取与纯化的方法，并研究其与CaM的相互作用。方法将NT的cDNA插入pGEX-6p-3质粒载体后，转化大肠杆菌BL-21感受态细胞，大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导NT的GST融合蛋白表达，GS-4B beads分离纯化，PreScission蛋白酶切除GST标签，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDSPAGE）检测蛋白纯度和相对分子质量。采用GST pull-down实验研究NT片段与CaM的相互作用。结果SDS-PAGE结果显示成功纯化获得NT蛋白片段，且具有较高的纯度。GST pull-down实验结果显示NT可与CaM结合，且具有浓度依赖性。结论本研究成功制备与纯化了心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段，为深入研究蛋白相互作用及NT的生物学功能奠定了基础。

NT；提取；纯化；CaM；GST pull-down实验

L型电压门控钙离子通道控制细胞钙离子（Ca2+）对膜电位变化的反应，并在心肌动作电位的产生、兴奋收缩偶联、激素和神经递质的分泌、释放等过程中起着重要的调节作用［1-5］。其中Cav1.2钙通道在心肌中高表达，是Ca2+进入细胞的主要途径，其C末端近端的PreIQ和IQ基序是公认的CaM结合位点，与CaM的相互结合在钙依赖性易化（Ca2+-dependent facilitation，CDF）和钙依赖性失活（Ca2+-dependent inactivation，CDI）调节过程中有显著作用［6-8］。然而，除了C末端的CaM结合区域外，还包括N末端的结合区域。据报道［9］，L型钙通……