人白细胞介素10受体α基因真核表达及与JAK1蛋白的相互作用的检测

郭欣欣 王刚 邓巧亭 吴涵韬 李坤 吴英松 刘天才

（南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所，广州 510515）

人白细胞介素10受体α基因真核表达及与JAK1蛋白的相互作用的检测

郭欣欣 王刚 邓巧亭 吴涵韬 李坤 吴英松 刘天才

（南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所，广州 510515）

构建含人白介素10受体α（IL-10RA）基因的真核表达质粒pENTER-IL-10RA-His，并在HEK293中进行真核表达，并用免疫共沉淀检测JAK1与IL10RA在细胞内的相互作用。在HeLa细胞中提取人总RNA，通过RT-PCR获得人IL10RA的基因全长，并将其克隆至真核表达载体pENTER-His中。经PCR扩增、双酶切、测序鉴定后，将重组质粒pENTER-IL-10RA-His转染至HEK293细胞中。免疫印迹法检测IL-10RA蛋白在HEK293细胞中的表达。结果显示，经PCR扩增和双酶切，测序鉴定质粒克隆正确。免疫印迹可见63 kD的目的蛋白。共同转染JAK1和IL-10RA的质粒，免疫印迹可见分别为133 kD和63 kD的目的条带，免疫共沉淀鉴定了JAK1和IL-10RA的相互作用。IL-10RA基因成功构建在pENTER-His中，并在HEK293细胞中成功表达，并成功共转染JAK1和IL-10RA质粒，免疫共沉淀检测两者的相互作用。这为JAK1和IL-10RA相互作用的机制研究奠定基础。

白介素10受体α（IL-10RA）；真核表达；免疫共沉淀；蛋白相互作用

人白介素10（Interleukin-10，IL-10）是一种通过跨膜受体介导的重要的免疫细胞调节因子，是重要的抗炎细胞因子之一。普遍认为，IL-10可以抑制炎症反应和各种肿瘤，增强体液免疫应答［1-5］。IL-10是由多种细胞释放的，对T细胞、B细胞和骨髓瘤细胞有不同的影响［6］，它可以下调Th1细胞因子的表达，促进B细胞的增值、生存。IL-10受体（IL-10R）由两条链组成，IL-10RA和IL-10RB，IL-10RA可以调节IL-10的免疫抑制信号，从而抑制促炎因子的合成［7，8］。……