采用HPLC—ELSD法测定冠心泰丸中两种人参皂苷的含量

肇静静+李文兰++尹涛

【摘 要】目的：建立同时测定冠心泰丸中两种人参皂苷（人参皂苷Rg1；人参皂苷Re）的高效液相-蒸发光散射含量检测方法。方法：采用色谱柱YMC-Pack ODS-A （250mmx4.6mm， 5μm），流动相乙腈（A）-水（B） 梯度洗脱系统，流速1.0mL /min。结果：人参皂苷Rg1线性范围为1.04μg～10.40μg，平均回收率为97.9 %，RSD值为2.0%；人参皂苷Re线性范围为1.02μg～10.20μg，平均回收率为95.6%，RSD值为1.6%。结论：HPLC-ELSD法测定结果精密准确，操作简单，适用于冠心泰丸的含量测定。

【关键词】人参皂苷Rg1 人参皂苷Re HPLC-ELSD法 含量测定

冠心泰丸由人参等14味中药制成，功效为益气养心、活血通脉，用于胸痹心痛之气阴两虚证，临床上对冠心病、心绞痛疗效确切。原标准中对人参皂苷Rg1进行了测定，但所采用的方法为薄层色谱扫描法，操作方法较为繁琐，干扰较大，重现性较差，给实际生产检测带来很大不便。人参皂苷含量测定方法已有很多报道[1、2、3]。本文采用HPLC-ELSD法，以求更为有效地控制冠心泰丸中人参皂苷的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪（Agilent1200 series）；蒸发光检测器（SEDEX LT-85）。

1.2 试药

人参皂苷Rg1（110703-201128 中国食品药品检定研究院）；人参皂苷Re（110754-201324 中国食品药品检定研究院）；乙腈（色谱纯TEDIR）；甲醇（AR）；水（注射用水）；冠心泰丸（哈药集团世一堂制药厂提供）。

2 方法與结果

2.1 色谱条件

YMC-Pack ODS-A 色谱柱（250mmx4.6mm 5μ）；以乙腈（A）-水（B）为流动相，按下表设定参数洗脱（见表1）；以蒸发光散射检测器检测。

柱温：35 ℃；漂移管温度：40℃；载气压力：3.0bar；流动相流速：1ml/min。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取对照品适量，用甲醇溶解，制成人参皂苷Rg1和Re浓度分别为0.2 mg/ml、0.3mg/ml的混合溶液，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

称取研磨好的冠心泰丸10g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇100ml，称定重量，静置16小时，超声处理（300W，40kHz）45分钟，放置至室温，称重，若有损失，用甲醇补足。滤过，取续滤液50ml，水浴挥干，用甲醇溶解残渣，制成10ml溶液，摇匀、滤过，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备

照冠心泰丸制法，去除人参，制成制剂，照2.2.2项下方法制成溶液。

2.3 线性关系考察

精密称取两种人参皂苷（Rg1和Re）对照品适量，加甲醇溶解，制成每1ml含两种人参皂苷（Rg1和Re）分别为0.52 mg和0.51mg的混合溶液。分别精密吸取对照品溶液2.0 μl、4.0 μl、8.0 μl、12μl、16μl、20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，分别以两种人参皂苷峰面积积分值的对数值（Y）和对照品量（μg）的对数值（X）作为纵坐标和横坐标，建立标准曲线，得回归方程：人参皂苷Rg1 Y=1.580X+2.206 r=0.9991（n= 6）。人参皂苷ReY=1.548X+2.252 r=0.9992（n= 6）。试验表明，人参皂苷Rg1的线性范围为1.04～10.40μg；人参皂苷Re的线性范围为1.02～10.20μg。

2.4 专属性考察

吸取2.2项下的溶液各10μl，进样。结果表明，阴性对照中各成分对人参皂苷Rg1和Re的检出无干扰；供试品中，其它成分吸收峰与人参皂苷Rg1和Re吸收峰均能较好分离。

2.5 重复性考察

取研磨好的冠心泰丸，重复测定6次。结果表明人参皂苷Rg1的平均含量为0.248mg/g，RSD为1.9% （n=6）；人参皂苷Re的平均含量为0.521mg/g，RSD为1.9% （n=6）。表明该方法重复性较好。

2.6 准确度考察

取已知含量的冠心泰丸，研磨细粉，称取6份，各约5.0g，置具塞锥形瓶中，加入混合对照品溶液（含人参皂苷Rg1 0.318 mg/ml，人参皂苷Re 0.550mg/ml）5ml、甲醇溶液95 ml，称重，放置16小时，测定含量，计算回收率。结果，人参皂苷Rg1的平均回收率为97.9%，RSD为2.0% （n=6）；人参皂苷Re的平均回收率为 95.6%，RSD为1.6% （n=6）。

2.7 样品测定

选择3批连续批号样品进行测定。结果，两种人参皂苷（Rg1和Re）的平均含量分别为0.23mg/g和0.50mg/g。

3 结语

本实验曾采用203nm波长进行检测，结果基线漂移较严重，影响了两种人参皂苷的有效检出，而采用蒸发光检测能很好的解决基线漂移的问题。

原标准中采用薄层扫描检测法只测定了人参皂苷Rg1的含量，且检出限度较低，干扰较大，重现性差。本试验方法可同时有效检测出两种人参皂苷的含量，重现性好，操作简便，可用于冠心泰丸的质量控制。

参考文献：

[1]刘高峰，顾凤云，徐凯建，等.薄层扫描法测定肝素宁胶囊人参皂苷 Rg1的含量[J].中国中药杂志，1996，21（9）：542-543.

[2]王林，赵春杰，王书法.比色法测定君春乐胶囊中人参皂苷的含量[J].中国药学杂志，1995，30（6）：364-365.

[3]闫天午，宋成吉，杜秀娟.人参首乌精中人参皂苷含量测定[J].中成药，1993，15（11）：14 -15.