Genistein对大鼠卵巢颗粒细胞CYP19表达的影响

温海霞+孟毅++杨永斌+殷立维++张若瞳

[摘要] 目的 觀察大豆异黄酮主要活性成分金雀异黄素（Genistein）对大鼠卵巢颗粒细胞CYP19表达的影响，探讨可能的分子机制。 方法 选择25～28日龄的雌性大鼠21只，采用孕马血清促性腺激素（PMSG）皮下注射法建立促卵泡发育模型，分离颗粒细胞进行培养。实验分为0、0.1、1、5、10、100 μmol/L Genistein组、17β-E2（10 nmol/L）组、雌激素受体（ER）-α阻断剂Tamoxifen（1 μmol/L）预处理30 min后加Genistein（1和10 μmol/L）组，空白对照组即0 μmol/L Genistein组。各组细胞处理48 h后，采用RT-PCR法检测CYP19及其上游调控基因肝受体类似物（LRH-1）mRNA的表达。 结果 1、5和10 μmol/L Genistein组CYP19和LRH-1mRNA的表达高于空白对照组（P < 0.05）；而100 μmol/L Genistein组CYP19和LRH-1 mRNA的表达与空白对照组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。与10 μmol/L Genistein相比，Tamoxifen（1 μmol/L）预处理细胞30 min后再加入10 μmol/L Genistein组LRH-1 mRNA的表达明显下降（P < 0.05），而CYP19 mRNA的表达则未受Tamoxifen的影响（P > 0.05）。 结论 1、5和10 μmol/L Genistein可明显上调大鼠卵巢颗粒细胞CYP19和LRH-1 mRNA表达，但这种促进作用可能并非通过ER-α介导。

[关键词] 大豆异黄酮；Genistein；卵巢颗粒细胞；CYP19；LRH-1

[中图分类号] R96 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）12（b）-0020-04

Effects of Genistein on the CYP19 expression in rat ovarian granulosa cells

WEN Haixia1 MENG Yi2 YANG Yongbin1 YIN Liwei1 ZHANG Ruotong1

1.Department of Physiology， Harbin Medical University， Heilongjiang Province， Harbin 150081， China； 2.Heilongjiang Nursing College， Heilongjiang Province， Harbin 150086， China

[Abstract] Objective To investigate the effects and molecular mechanism of Genistein， which is a major active component for soy isoflavones， on the CYP19 expression in the rat ovarian granulosa cells. Methods 21 female rats， 25-28 day-old， were injected subcutaneously with pregnant mare serum gonadotrophin （PMSG）， ovarian granulosa cells were collected， incubated and treated with Genistein （0， 0.1， 1， 5， 10， 100 μmol/L）， 17β-E2 （10 nmol/L）， and Genistein （1， 10 μmol/L） with estrogen receptor-α （ER-α） blocker Tamoxifen （1 μmol/L） pretreated for 30 min. Control group was 0 μmol/L Genistein group. After treated for 48 h， the CYP19 and upstream regulated gene liver receptor homolog-1 （LRH-1） mRNA expression levels were assessed by RT-PCR. Results Compared with the control group， the expression of CYP19 and LRH-1 mRNA increased for 1， 5 and 10 μmol/L Genistein group （P < 0.05）； but the expression of CYP19 and LRH-1 mRNA for 100 μmol/L Genistein group had no significant difference （P > 0.05）. Compared with 10 μmol/L Genistein group， the expression of LRH-1 mRNA decreased for Genistein （10 μmol/L） with Tamoxifen （1 μmol/L） pretreated for 30 min （P < 0.05）， but the expression of CYP19 mRNA was not influenced by Tamoxifen （P > 0.05）. Conclusion 1， 5 and 10 μmol/L Genistein can up-regulation the expression of CYP19 and LRH-1 mRNA in the rats ovarian granulosa cells. The molecular mechanism of Genistein effect on the CYP19 gene expression is not mediated by ER-α.

[Key words] Soy isoflavones； Genistein； Ovarian granulosa cells； CYP19； LRH-1

大豆异黄酮主要活性成分金雀异黄素（Genistein）具有极强的抗氧化能力[1-2]，因化学结构与雌激素非常相似，能与雌激素受体（ER）结合发挥雌激素样作用，也被称为植物雌激素[3]。研究表明，大豆异黄酮可调节雌性内分泌活动，改善围绝经期综合征临床症状[4-8]。卵巢颗粒细胞芳香化酶基因CYP19是雌激素生成的关键酶，之前研究发现，大豆异黄酮可影响衰老模型大鼠卵巢芳香化酶的表达[9]，但分子机制尚不清楚。本研究采用细胞培养、RT-PCR等方法，观察Genistein对大鼠卵巢颗粒细胞CYP19及上游调控基因表达的影响，并利用ER-α阻断剂进一步观察Genistein对CYP19基因表达的影响与ER-α的关系，探讨大豆异黄酮调节卵巢局部内分泌功能的分子机制。

1 对象与方法