香菇转色前后Atg8表达的变化规律研究*

房丽丽，杨 丽，李翠新，刘庆洪**

（1.西南林业大学生命科学学院，云南 昆明 650224；2.中国农业大学生物学院，北京 100094）

香菇转色前后Atg8表达的变化规律研究*

房丽丽1，2，杨 丽2，李翠新1，刘庆洪2**

（1.西南林业大学生命科学学院，云南 昆明 650224；2.中国农业大学生物学院，北京 100094）

比对香菇（Lentinula edodes）Atg8蛋白基因的同源序列，经反转录PCR确定香菇Atg8的外显子序列。构建其表达质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)plyS获得其表达菌株。采用镍柱和MonoQ纯化表达的Atg8蛋白，成功制备兔多隆抗体。通过western－blotting对转色前后Atg8蛋白的表达量进行对比。香菇Atg8蛋白基因长度为603 bp，Atg8蛋白分子量25 kDa左右，且为可溶性蛋白。转色后的香菇Atg8蛋白杂交条带较微弱，而转色前杂交条带几乎没有。表明转色后的香菇菌丝Atg8表达量比转色前含量高。

香菇；转色；自噬；Atg8

自噬（Autophagy）是通过包裹蛋白质、受损或破坏的细胞器，运送到溶酶体并降解，再释放到细胞质的过程。自噬分为3种：巨自噬、微自噬、分子伴侣介导自噬[1]。本文未特殊说明均为巨自噬（简称自噬）。自噬参与多种生理和病理活动，是生命活动中必不可少的代谢过程[2]。自噬蛋白（Autophagyrelated gene,ATG）Atg8是自噬过程的核心[3]，其是自噬过程中保守的编码蛋白，故用Atg8作为自噬过程的指示蛋白[4－6]。目前自噬的研究主要集中在酵母、线虫、哺乳动物等，针对大型真菌方向的研究鲜见报道。

转色是香菇（Lentinula edodes） 生长过程中很重要的过程。转色的好坏直接关系到香菇的产量与品质[7－8]。目前香菇转色的相关研究主要集中在菌丝的长势、温度、光照、湿度等[9]。研究发现，碳元素与氮元素的比值直接影响香菇的转色[10]，而碳元素与氮元素的比值改变（营养缺乏）又可以诱导自噬[11]。……