引物3’端不同碱基错配情况下实时荧光定量PCR非特异性扩增的发生规律

李金春，李家鹏，周 彤，乔晓玲，许随根，戚 彪，米瑞芳，曲 超，许 典

引物3’端不同碱基错配情况下实时荧光定量PCR非特异性扩增的发生规律

李金春，李家鹏*，周 彤，乔晓玲*，许随根，戚 彪，米瑞芳，曲 超，许 典

（中国肉类食品综合研究中心，肉类加工技术北京市重点实验室，北京 100068）

以错配反应与正常反应之间的ΔCt值为指示，研究不同碱基错配类型、位置与个数条件下引物3´端与模板之间非特异性扩增的发生规律，并构建ΔCt值的二次多项式回归模型。结果表明，碱基错配种类、位置、个数对实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，RT-qPCR）的非特异性扩增都有显著影响，并呈现出较强的规律性。碱基类型上，研究的各个位置上异型错配较易发生非特异性扩增，而同型错配则较难发生，并且两种错配类型之间有显著性差异（P＜0.05）；错配位置上，相同条件下引物3’端第1位碱基错配对ΔCt值影响最大，错配位置远离3’端时对ΔCt值的影响逐渐减小，非特异性扩增也更容易发生；错配个数上，随着错配碱基个数的增加对ΔCt值得影响程度不断增大，非特异性扩增较难发生。构建ΔCt值预测模型R2达到0.837 1，根据此模型可以预测出不同位置、不同错配类型条件下ΔCt值，从而可以判断RT-qPCR非特异性扩增的发生的难易程度。

肉类掺假；循环阈值；碱基错配；非特异性扩增；引物特异性

实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative realtime polymerase chain reaction，RT-qPCR）技术具有准确度高、稳定性好、高效便捷等优点，已广泛应用于食品真伪与掺假鉴别[1-4]、食品转基因成分检测[5-6]、食品致病菌检测[7-9]等多个检测项目中，已成为肉类品种鉴别的主流方法[10-11]，在食品安全监管中发挥着重要作用。……