浅析耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶的检测及耐药性

李娟　邓秋连　龙燕　黄钰君　尚彦彦　席红利

【摘要】 目的：研究并探討耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶的检测及耐药性。方法：收集2014年1月-2016年12月本院分离得到的耐头孢西丁肠杆菌科细菌300株作为研究对象，对这300株耐头孢西丁肠杆菌科细菌采用氯唑西林增效试验法测定其中的AmpC酶，采用双纸片确诊试验测定其中的超广谱β内酰胺酶，再选用12种常用抗生素作为药敏试验药物，对其耐药性进行检测，比较单产AmpC酶组与非产酶组对12种常用抗生素的耐药性。结果：300株耐头孢西丁肠杆菌科细菌中共检出单产AmpC酶菌85株，占比28.33%。在头孢曲松、氨曲南、哌拉西林、哌拉西林舒巴坦中，单产AmpC酶组的耐药性均明显高于非产酶组（P<0.05）；在头孢唑林、环丙沙星、氨苄西林、氨苄西林舒巴坦中，单产AmpC酶组和非产酶组的耐药性均超过50%，但两组比较差异均无统计学意义（P>0.05）；在头孢吡肟、头孢哌酮钠舒巴坦、阿米卡星、亚胺培南中，单产AmpC酶组和非产酶组的耐药性均不足50%，但两组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。300株耐头孢西丁肠杆菌科细菌中，5重以上耐药菌株共有130株，占比43.33%，单产AmpC酶组的5重以上耐药菌株占比明显高于非产酶组（P<0.05）。结论：耐头孢西丁肠杆菌科细菌的AmpC酶单产率较高，单产AmpC酶菌的多重耐药性较高，临床上治疗由耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶菌所致感染时，应根据其药敏检测结果，选用耐药性较低的抗生素进行治疗，如亚胺培南、阿米卡星等。

【关键词】 耐头孢西丁肠杆菌科细菌； AmpC酶； 耐药性； 抗生素

Detection and Drug Resistance Analysis of Cefoxitin Resistant Enterobacteriaceae AmpC Enzyme/LI Juan，DENG Qiu-lian，LONG Yan，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（14）：050-053

【Abstract】 Objective：To study and explore the detection and drug resistance of Cefoxitin resistant Enterobacteriaceae AmpC enzyme.Method：A total of 300 strains of Cefoxitin resistant Enterobacteriaceae from January 2014 to December 2016 in our hospital were obtained and collected as the research object.The AmpC enzyme of them were detected by Cloxacillin potentiated test method，the ESBLs of them were confirmed by double disk test.12 kinds of commonly used antibiotics were choosed as drug susceptibility test to detect the drug resistance，and drug resistance of 12 kinds of commonly used antibiotics of yield AmpC enzyme group and non enzyme group were compared.Result：In 300 strains of Cefoxitin resistant Enterobacteriaceae，85 strains of yield AmpC enzyme bacteria were detected，accounting for 28.33%.In Ceftriaxone，Aztreonam，Piperacillin，Piperacillin Sulbactam，drug resistance of yield AmpC enzyme group were significantly higher than those of non Enzyme group（P<0.05）.In Cefazolin，Ciprofloxacin，ampicillin，Ampicillin Sulbactam，drug resistance of two groups were both more than 50%，but two groups had no significant difference（P>0.05）.In Cefepime，Cefoperazone Sulbactam，Amikacin，Imipenem，drug resistance of two groups were both less than 50%，but two groups had no significant differences（P>0.05）.In 300 strains of Cefoxitin resistant Enterobacteriaceae，more than 5 weight resistant strains were 130 strains，accounting for 43.33%，and the proportion of more than 5 weight resistant strains of yield AmpC enzyme group was significantly higher than that of non enzyme group（P<0.05）.Conclusion：Yield rate of AmpC enzyme of Cefoxitin resistant Enterobacteriaceae is higher，multi drug resistant of yield AmpC enzyme strains is also higher.Clinical treatment of infection by Cefoxitin resistant Enterobacteriaceae AmpC enzyme bacteria should select low resistance to antibiotics，according to the drug sensitivity test results，such as Imipenem，Amikacin.

【Key words】 Cefoxitin resistant Enterobacteriaceae； AmpC enzyme； Drug resistance； Antibiotics

First-authors address：Cancer Center of Guangzhou Medical University，Guangzhou 510095，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.14.014

近年来，随着细菌中β内酰胺酶的产生，革兰阴性杆菌中的耐药菌株增多，导致临床治疗过程中采用β内酰胺类抗生素治疗革兰阴性杆菌感染的效果欠佳，尤其是AmpC酶菌，在持续采用头孢西丁治疗过程中，肠杆菌科细菌AmpC酶的耐药性逐渐增高，头孢西丁对肠杆菌科细菌AmpC酶感染的抑菌作用逐渐减弱，因此，有必要针对肠杆菌科细菌AmpC酶感染的耐药性进行深入研究和分析，为肠杆菌科细菌AmpC酶感染患者选择合适的抗生素治疗[1-3]。目前，临床上关于AmpC酶耐药性的研究报道增多，普遍发现AmpC酶对多种抗生素产生耐药性，为证实这一点，且为探讨耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶的检测及耐药性，本次研究收集2014年1月-2016年12月本院分离得到的耐头孢西丁肠杆菌科细菌300株，对其进行AmpC酶检测和耐药性分析。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 收集2014年1月-2016年12月本院分离得到的耐头孢西丁肠杆菌科细菌300株作为研究对象，包括109株大肠埃希菌、128株阴沟肠杆菌、63株产气肠杆菌。所有菌株均经由法国生物梅里公司生产的VITEK2全自动微生物鉴定仪及配套鉴定卡确认，将大肠埃希菌ATCC25922设为AmpC酶阴性对照，将已知AmpC酶阴沟肠杆菌设为AmpC酶阳性对照组。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC28753。

1.1.2 抗生素及培养基 抗生素选择头孢西丁、头孢曲松、氨曲南、哌拉西林、哌拉西林舒巴坦、头孢唑林、环丙沙星、氨苄西林、氨苄西林舒巴坦、头孢吡肟、头孢哌酮钠舒巴坦、阿米卡星、亚胺培南。培养基选择法国生物梅里埃公司生产的M-H培养基，选择法国生物梅里埃公司生产的GNB鉴定卡和GNB藥敏卡。

1.2 方法

1.2.1 AmpC酶检测 采用纸片扩散法对头孢西丁纸片进行测定，如抑菌环直径不足17 mm，即为头孢西丁耐药，将其菌株作为初筛菌株。对耐头孢西丁肠杆菌科细菌采用氯唑西林增效试验法测定其中的AmpC酶，采用灭菌纯化水与氯唑西林混合成浓度为10 g/L的溶液，采用微量加样器取氯唑西林20 μL置于药敏纸片中心，制成氯唑西林复合片，在超净台晾干，再置于零下20 ℃的冰箱中保存。将氯唑西林复合片与标准药敏纸片同时贴在一块涂有受检菌株的M-H培养基上，如氯唑西林复合片的抑菌环直径相比于标准药敏纸片的抑菌环超过至少5 mm，即为AmpC阳性，反之则为阴性[4]。

1.2.2 超广谱β内酰胺酶检测 采用双纸片确诊试验测定其中的超广谱β内酰胺酶，采用K-B纸片扩散法操作，将含克拉维酸与不含克拉维酸的纸片放置于35 ℃环境下保存过夜，如含克拉维酸纸片的抑菌环直径相比于不含克拉维酸纸片的抑菌环超出至少5 mm，即可判断为超光谱β内酰胺酶阳性，反之则为阴性[5]。

1.2.3 药敏试验 药敏试验检测方法为最小抑菌浓度法，检测结果的判读标准为美国国家临床实验室标准委员会于2004年颁布的标准。药敏试验结果判定标准，（1）敏感（S）：高浓度微孔、低浓度微孔均未出现变色，即菌株对该种抗生素敏感；（2）中介（I）：高浓度微孔未出现变色，低浓度微孔变红，即菌株对该种抗生素中介敏感；（3）耐药（R）：高浓度微孔、低浓度微孔均变红，即菌株对该种抗生素耐药[6]。

1.3 观察指标 比较单产AmpC酶组与非产酶组对12种常用抗生素的耐药性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计分析，计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 耐头孢西丁肠杆菌科细菌中单产AmpC酶的检出情况 300株耐头孢西丁肠杆菌科细菌中共检出单产AmpC酶菌85株、单产超广谱β内酰胺酶菌81株、双产酶菌59株，其余75株为非产酶菌，其中，单产AmpC酶菌占比28.33%。

2.2 单产AmpC酶菌与非产酶菌的药敏结果比较 为避免超广谱β内酰胺酶对药敏结果产生干扰，本次研究仅对单产AmpC酶菌与非产酶菌的药敏结果进行比较。在头孢曲松、氨曲南、哌拉西林、哌拉西林舒巴坦中，单产AmpC酶组的耐药性均明显高于非产酶组（P<0.05）；在头孢唑林、环丙沙星、氨苄西林、氨苄西林舒巴坦中，单产AmpC酶组和非产酶组的耐药性均超过50%，但两组比较差异均无统计学意义（P>0.05）；在头孢吡肟、头孢哌酮钠舒巴坦、阿米卡星、亚胺培南中，单产AmpC酶组和非产酶组的耐药性均不足50%，但两组比较差异均无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.3 单产AmpC酶菌与非产酶菌5重以上耐药情况比较 300株耐头孢西丁肠杆菌科细菌中，5重以上耐药菌株共有130株，占比43.33%，单产AmpC酶组的5重以上耐药菌株占比明显高于非产酶组（P<0.05），见表2。

3 讨论

AmpC酶的全称为“AmpCβ内酰胺酶”，是一种由肠杆菌科细菌、绿脓假单胞菌、质粒介导产生的β内酰胺酶，属于β内酰胺酶的一种，在β内酰胺酶中按照分子结构分类法被归为“C类”，按照功能分类法被归为“第一群”，是一种可作用于头孢菌素且不受到克拉维素抑菌作用的β内酰胺酶，又被称为“头孢菌素酶”[7-11]。含有AmpC酶的菌株可对头孢菌素类抗生素、单酰胺类抗生素进行水解，且不受到β内酰胺酶抑制剂的影响，因此，AmpC酶菌引起的感染治疗难度较大。因此，临床上应对AmpC酶的耐药性进行深入分析，研究AmpC酶对各类抗生素的药物敏感性，以寻求对AmpC酶可有效抑制的抗生素[12-13]。

现阶段，AmpC酶的检测主要是利用AmpC酶水解头孢西丁原理，即含有AmpC酶的菌株对头孢西丁不敏感，而超广谱β内酰胺酶等其他β内酰胺酶对头孢西丁无法进行分解，即其对头孢西丁较为敏感，临床上利用这点，常采用头孢西丁纸片对AmpC酶菌株进行初筛，但临床实际工作中，纸片扩散法对AmpC酶的检测步骤较多[14-18]。本次研究中采用双纸片氯唑西林增效试验对AmpC酶进行检测，检测后发现，300株耐头孢西丁肠杆菌科细菌中共检出单产AmpC酶菌85株，占比28.33%，说明耐头孢西丁肠杆菌科细菌中含有AmpC酶的概率较高。本次研究还发现，300株耐头孢西丁肠杆菌科细菌中共有5重以上耐药菌株130株，占比43.33%，单产AmpC酶组的5重以上耐药菌株占比明显高于非产酶组（P<0.05），进一步说明AmpC酶菌感染的治疗难度较大，对多种抗生素产生耐药性，临床治疗时应严格把握AmpC酶菌对抗生素的耐药性。

本次研究为探讨AmpC酶对各类抗生素的耐药性，对单产AmpC酶菌与非产酶菌的药敏结果进行比较，发现在头孢曲松、氨曲南、哌拉西林、哌拉西林舒巴坦中，单产AmpC酶组的耐药性均明显高于非产酶组（P<0.05），这提示我们在治疗肠杆菌科细菌AmpC酶感染时，应谨慎选择头孢曲松、氨曲南、哌拉西林、哌拉西林舒巴坦；在头孢唑林、环丙沙星、氨苄西林、氨苄西林舒巴坦中，单产AmpC酶组和非产酶组的耐药性均超过50%，而在头孢吡肟、头孢哌酮钠舒巴坦、阿米卡星、亚胺培南中，单产AmpC酶组和非产酶组的耐药性均不足50%，但两组比较差异均无统计学意义（P>0.05），这提示在治疗肠杆菌科细菌AmpC酶感染时，应避免使用头孢唑林等耐药性较高的药物，而尽可能选用药物敏感性较高的亚胺培南、阿米卡星等药物，尤其是亚胺培南，AmpC酶对其基本不耐药，可作为肠杆菌科细菌AmpC酶感染治疗时的首选抗生素[19-20]。

综上所述，耐头孢西丁肠杆菌科细菌的AmpC酶单产率较高，单产AmpC酶菌的多重耐药性较高，临床上治疗由耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶菌所致感染时，应根据其药敏检测结果，选用耐药性较低的抗生素进行治疗，如亚胺培南、阿米卡星等。

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（收稿日期：2017-03-27） （本文编辑：程旭然）