GFP-Nurr1基因修饰神经干细胞的建立及过表达Nurr1对神经干细胞向多巴胺神经元分化的影响

陈孝祥， 宋晓斌， 王向鹏， 徐蛟天， 林 海， 王 威， 杨智勇， 邓兴力

GFP-Nurr1基因修饰神经干细胞的建立及过表达Nurr1对神经干细胞向多巴胺神经元分化的影响

陈孝祥， 宋晓斌， 王向鹏， 徐蛟天， 林 海， 王 威， 杨智勇， 邓兴力

目的 利用慢病毒载体建立GFP-Nurr1基因修饰的原代神经干细胞(NSCs)模型并观察Nurr1过表达后NSCs向多巴胺神经元的分化影响。方法 利用基因重组构建pLenO-DCE-Nurr1慢病毒载体，用慢病毒转染第三代NSCs，转染72 h后荧光检测转染效果；设置空白对照组、空载体组及DCE-Nurr1组，分别用Western blot及PCR检测Nurr1的表达差异；并将转染后的NSCs分化培养7 d后分别用免疫细胞化学检测、Western blot及PCR检测酪氨酸羟化酶(TH)的表达。结果 慢病毒转染NSCs 72 h后，转染率可达90%，与对照组相比DCE-Nurr1组高表达Nurr1。经慢病毒载体感染后的NSCs仍具备分化潜能，分化培养后发现DCE-Nurr1组分化的神经细胞中TH阳性细胞分化率90.60%，对照组为21.2%。结论 慢病毒载体可高效转染NSCs过表达Nurr1；Nurr1基因过表达可以促进中脑腹侧来源NSCs向TH阳性多巴胺能神经元方向分化。

Nurr1； 基因修饰； 慢病毒； 神经干细胞

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)的典型运动症状主要表现为运动徐缓，静止性震颤及肌强直，主要由于中脑黑质多巴胺神经元(dopaminergic neuron，DA neuron)的渐进性变性丢失引起，目前尚无治疗方法可延缓其疾病进程[1]。根据近几年的研究表明，神经干细胞(neural stem cells，NSCs)具有多分化潜能，能体外培养诱导成神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞，因此通过移植神经干细胞有望成为PD治疗的新希望。目前，已在PD动物模型上得到证实，通过移植体外培养的NSCs后能改善PD动物行为学症状[2，3]。……