含二硫键的蛋白质/多肽的MALDI-TOF MS源内裂解研究

姚文斌，汪亿晗，苏 蕊，连文慧，杨洪梅,2，陈长宝，刘淑莹

(1.长春中医药大学，吉林省人参科学研究院，吉林 长春 130117；2.中国科学院长春应用化学研究所，吉林 长春 130022)

含二硫键的蛋白质/多肽的MALDI-TOF MS源内裂解研究

姚文斌1，汪亿晗1，苏 蕊1，连文慧1，杨洪梅1,2，陈长宝1，刘淑莹1

(1.长春中医药大学，吉林省人参科学研究院，吉林 长春 130117；2.中国科学院长春应用化学研究所，吉林 长春 130022)

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)法研究含二硫键的人胰岛素与甘精胰岛素酶解液的源内裂解(ISD)。比较了不同基质种类及不同结晶状态对含二硫键的人胰岛素与甘精胰岛素酶解液的源内裂解的影响。结果表明，含二硫键的蛋白质的ISD发生受激光点照射位置的影响，在不同基质与结晶形态的条件下，含二硫键的蛋白质的ISD碎片信息不同。通过分析比较，含二硫键的蛋白质的ISD较容易控制，并且其基质的种类及结晶状态作用很关键。需要获得大量碎片时，使激光照射在样品和阿魏酸(FA)基质形成的大结晶处；不希望出现碎片时，可使用2,4,6-三羟基苯乙酮(THAP)为基质，或使激光照射在样品和其他基质形成的细小均匀结晶处。

含二硫键的蛋白质/多肽；基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)；源内裂解(ISD)；基质；结晶

基质辅助激光解吸电离(MALDI)技术是由Karas和Tanaka等[1-2]发明的，由于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)具有质量范围宽、耐盐和灵敏度高等优点[3-5]，利用该技术分析蛋白质的应用日益广泛。二硫键是一种常见的蛋白质翻译后修饰，对稳定蛋白质的空间结构[6-9]、维持正确的折叠构象[10-12]、保持及调节生物活性[13-15]等都有着重要作用。……