5-氮胞苷联合碱性成纤维生长因子诱导人胚胎干细胞定向心肌样细胞分化的实验研究

王 力，方志荣，高连如，张宁坤，徐小红，朱智明

5-氮胞苷联合碱性成纤维生长因子诱导人胚胎干细胞定向心肌样细胞分化的实验研究

王 力，方志荣，高连如，张宁坤，徐小红，朱智明

目的 探讨5-氮胞苷(5-azacytidine，5-aza)联合碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)体外诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells，hESCs)定向分化为心肌样细胞的可行性。方法 采用小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts，MEF)作为饲养层细胞体外培养hESCs，经悬浮培养形成拟胚体(embryoid bodies，EB)，贴壁后分为无诱导剂组(对照组)、5-aza诱导组、bFGF诱导组、5-aza＋bFGF联合诱导组4组诱导培养。诱导时间为2周。倒置相差显微镜下连续动态观察细胞形态学变化，并计算各组出现自发搏动的EB，以定量聚合酶链反应检测心肌细胞特异性基因NKX2.5、GATA4、α-actin，免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白T(cardiac troponin T，cTnT)。结果 EB克隆贴壁诱导3～4 d后部分细胞出现自发性节律性搏动，以5-aza＋bFGF联合诱导组为著。14 d后定量聚合酶链反应检测示5-aza＋bFGF联合诱导组NKX2.5、GATA4、α-actin表达显著高于其他3组(P＜0.05)。免疫荧光法示5-aza＋bFGF联合诱导组cTnT的表达最为明显(P＜0.05)。结论 hESCs在体外经5-aza＋bFGF联合诱导后可定向心肌细胞分化，该诱导方案为心肌再生与组织工程领域的研究奠定了基础。

心肌细胞；细胞分化；人胚胎干细胞；5-氮胞苷；碱性成纤维生长因子

随着冠心病治疗手段的发展，心肌梗死患者早期病死率在1986—2011年的25年间降低了75%，但总体上来看，心肌梗死发病率和病死率仍很高[1]。同时，在已接受冠状动脉介入治疗的患者中，仍有超过30%的患者会出现心肌梗死后心室重构、心力衰竭等诸多并发症。除了目前临床上常规的药物、介入、外科搭桥等治疗手段外，再生医学为冠心病治疗领域打开了一扇新的窗户。……