抗嗜水气单胞菌解淀粉芽孢杆菌的抗菌机理研究及其微胶囊制剂的安全性评价

杨柳++袁文++刘迎

随着我国水产养殖业的迅猛发展，各种养殖病害平凡发生，于是出现抗生素被大量使用，最终导致病原菌耐药性增强，致使生态养殖环境遭到干扰和破坏，水产品抗生素残留严重，对人类健康产生巨大的危害。抗菌芽孢杆菌以其独有的耐高温性，耐挤压性、耐酸碱性等等优良性能，被国内为诸多专家学者认为是最有发展钱劲爆的优良益生菌之一。抗菌机制，指的是抗菌功能的基因检测、抗菌活性物质及其相关的鉴定与特性分析，抗菌活性物质的作用机理研究，已成为抗菌芽孢杆菌的一个前卫的研究方向。

抗嗜水气单胞菌解淀粉芽孢杆菌的分离及抗嗜水气单胞菌的拮抗效果

从养殖池的污泥中分离筛选出一株抗嗜水气单胞菌的优良菌株解淀粉芽孢杆菌，其对抗嗜水气单胞菌的拮抗活性显著高于类产碱假单胞菌，地衣芽孢杆菌等等菌株，并且进一步对抗嗜水气单胞菌的优良菌株解淀粉芽孢杆菌的分类地位以及对抗嗜水气单胞菌的抗菌效果进行研究。目前常用的细菌分类鉴定方法中，16SrDNA序列分析方法和API细菌鉴定系统是常用的细菌分类鉴定的有效参照系统，但是这两种方法还存在着一定的不足，细菌分类鉴定必须将以上两种方法相结合，以使得鉴定方法更加科学，结果更加可靠准确。纸片法是筛选及研究拮抗微生物最常用的方法之一，它不但具有利于观察拮抗菌分泌抗菌物质产生的抑菌区，而且还可以观察到具有生长优势细菌的拮抗作用，因此，选取纸片法来作为抗嗜水气单胞菌，淀粉芽孢杆菌优良菌株的筛选及抗菌活性的分析方法。实验表明，解淀粉芽杆胞菌对嗜水气单胞菌的生长具有很好的抑制作用，对抗嗜水气单胞菌感染也同样具有良好的保护效果，此实验在在一定程度上表明解淀粉芽杆胞菌对鱼类养殖抗嗜水气单胞菌感染具有保护作用机理，也同时证实了解淀粉芽杆胞菌作为嗜水气单胞菌拮抗菌应用于鱼类养殖的可行性。

抗嗜水气单胞菌解淀粉芽孢杆菌的比较蛋白质组学及抗菌素相关的基因分析

解淀粉芽孢杆菌的优良菌株的图谱蛋白质点为1135个，匹配率高达89.37%，与解淀粉芽孢杆菌的优良菌株的突变株菌体蛋白图谱作对比，解淀粉芽孢杆菌的优良菌株共有65个差异蛋白质点，其中包含36个高丰度的差异差异蛋白质，经鉴定与蛋白质的合成与修饰，能量的代谢，菌体抗逆的自我保护等等生理功能有关，揭示了 解淀粉芽孢杆菌的优良菌株产生的抗菌蛋白直接参与抗菌作用，并且其对环境的抗逆能力也具有很重要的意义。解淀粉芽孢杆菌的优良菌株中仅仅只含有伊枯草菌素合成的必须基因，该基因与枯草胞杆菌MH25的亲缘关系最近，除此之外，解淀粉芽孢杆菌的优良菌株与伊枯草菌素合成的必需基因的编码产物不具有明显的跨膜结构，但是该基因的结构中存在着AMP结合位点和PP结合位点。

抗嗜水气单胞菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊制剂的安全性评价

抗嗜水气单胞菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊在最终浓度为0.2mg/L～2000mg/L时对小球藻的生长具有很强的促进作用，对小球藻的半数抑制浓度则大于2000mg/L，并且对于大型的蚤和斑马鱼以及草鱼致死浓度也是大于2000mg/L。若在养殖的水体中加入解淀粉芽孢杆菌微胶囊至浓度为0.2mg/L～2000mg/L后的14天之内，各个浓度组的氨氮含量和硫化物的含量以及PH值均會缓慢的下降，只有亚硝酸盐的氮含量会稍稍升高后逐渐缓慢的降低，但是这些理化因子的变化与抗嗜水气单胞菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊的加入量呈负相关的关系，故此推出，抗嗜水气单胞菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊制剂实际无毒，对养殖水的氨氮，亚硝酸盐氮以及硫化物，PH等因子的影响均控制在诸多水产养殖动物的安全浓度内，此结论为抗嗜水气单胞菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊制剂在水产养殖中的安全应用提供了重要的科学依据。

通过研究抗嗜水气单胞菌解淀粉芽孢杆菌的比较蛋白质组学我们清楚地了解到抗嗜水气单胞菌解淀粉芽孢杆菌所培育出的优良菌株其产生的抗菌蛋白可以直接参与抗菌，对环境的超强抗逆能力，对生长性能的抗菌能力都使得它的存在具有重要的意义。通过对抗嗜水气单胞菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊制剂的安全性分析我们可以清楚地得知该胶囊实际无毒副作用，可以安全的应用于水产养殖行业。