春兰“龙字”的离体快繁技术研究

冯兆光，李小东，徐 兵

(青州市花卉高科技博览园管理委员会，山东 青州 262500)

春兰(Cymbidium goeringii)是国兰种类最丰富多彩的一个种，也是栽培过程中繁殖最困难的一个种之一，其香味最佳，但繁殖系数很低，最多1年2～3倍，通过组织培养方法能快速满足生产需要，在短时间内提供大量种苗。目前兰花组织培养在如大花蕙兰、蝴蝶兰、杂交兰等工厂化生产技术已经非常成熟，但国兰由于价格昂贵、易褐化、再生过程难度高，难以实现工厂化快繁[1]。本研究以春兰荷型水仙的典型代表“龙字”为研究材料，研究国兰通过组织培养获得再生苗的方法，以期为实现国兰的工厂化生产提供参考。

1 材料与方法

1.1 取材及消毒

供试材料为春兰“龙字”的侧芽，取材前先室内养护3～4个月，浇水时避免浇到新芽上。待芽长到3～4 cm时取下，用洗衣粉水轻轻洗净表面，在超净工作台内用75%酒精浸泡30 s，再用0.1%的升汞浸泡8～10 min，然后用无菌水洗5次，每次5 min，剥掉外层叶片后，接种到诱导培养基中。

1.2 供试培养基及培养条件

（1）诱导培养基:

1#MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+AC0.2g/L；

2#MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L。

（2）龙根增殖培养基:

3#MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AC 0.5 g/L；

4#1/2 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L；

5#MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L；

6#1/2 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L。

（3）芽分化培养基:

分化培养基筛选采用3因素4水平的L16(43)正交设计（表1），每个处理接种4瓶，每瓶接种10块龙根，重复3次。

表1 供试因素及水平

（4）生根培养基:

23#1/2 MS+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L；24#1/2MS+NA A0.5mg/L+AC1g/L+香蕉泥 50g/L；25#B5+BA 2 mg/L+NAA 0.3 mg/L+AC 1 g/L+香蕉泥50 g/L。

上述培养基pH 5.8，琼脂6 g/L，蔗糖30 g/L，于121℃杀菌 20 min。

（5）培养条件:培养温度 26±1℃，光照 14 h/d，光源由LED灯提供，光照强度1500 Lx。

2 结果与分析

2.1 龙根诱导培养

诱导培养20 d后，部分芽体仍无生长痕迹，一段时间后逐渐褐化死亡，30 d后少数芽体逐渐变绿顶端或周围逐渐生长出较细的龙根，说明诱导成功。诱导培养基中需添加少许活性炭能有效防止褐化，添加BA和NAA激素浓度越高龙根生长量越多。诱导率最高的培养基是2#MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AC 0.5 g/L，产生龙根多，生长快（表2）。

表2 丛生芽诱导结果

2.2 龙根增殖培养

表3 芽增殖培养结果

将诱导获得的根状茎转接到增殖培养基，60 d转接一次，最高增殖倍数为6倍。无机盐含量的增加和激素浓度的增加均能提高龙根增殖倍数，提高BA浓度能使龙根分叉较多从而提高增殖倍数，提高NAA浓度能使龙根伸长、变粗，BA/NAA比值较小的情况下龙根细长，所生长的芽不壮，对比之下最适宜龙根增殖的培养基为4#1/2MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AC 0.5 g/L（表3）。

2.3 龙根分化研究

选取2～3 cm粗壮的龙根，接种到分化培养基中，每瓶接种10块龙根。暗培养7 d后，正常光照培养。正常情况20 d后形成粗壮的芽点，40 d左右形成芽，120 d左右芽苗可生长到5 cm以上，BA/NAA比例越大分化越快，单用BA或NAA时分化较慢，分化芽数量少，添加AC可减轻褐化，但会降低芽苗分化率，并且苗瘦弱。综合考虑芽诱导率和苗生长情况确定18#培养基最佳即MS（NH4NO3 0.4 g/L）+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L，龙根几乎不增殖，苗壮，直立生长（表4）。

2.4 生根培养

选取5 cm以上小苗接种到生根培养基中，20 d后开始生根，24#培养基生根最快，但30 d后23#、24#培养基中部分小苗停止生长，从顶端或根部生长龙根。60 d后生根率最高的是25#培养基，生长侧芽，不存在龙根生长现象。经筛选最佳生根培养基为25#B5+BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+AC 1.0 g/L+香蕉泥50 g/L。

表4 芽分化培养结果

表5 生根培养结果

2.5 组培苗移栽

组培苗生长到90 d以上、苗高10 cm以上时及时练苗，在散射光下培养20 d左右后，此时可开盖移栽。洗净根部残留的培养基，用湿润的苔藓包裹移栽到穴盘中。把握好干透浇透的浇水原则，20 d内光照控制在5000 lx以下，成活率90%以上。

3 讨论

近年来，春兰由于花香、清雅、价格合适，比较受消费者欢迎，国兰组培成为花卉种苗公司的发展目标[2]，尤其是具有代表性的春兰品种:龙字、大富贵、绿云、宋梅等颇受欢迎。由于春兰组培过程中易褐化、再生难度大，因此尽快获得成熟的组培技术成为研究重点。大量生产中可以借鉴洋兰组培技术添加防褐化的VC、pvp等抗氧化剂，添加有机物质如苹果汁、椰汁中增加分化出芽率[3]。

与其他研究者使用的生根培养基不同，本研究使用BA与NAA混合，达到了使苗侧芽生长同时生根的双重目的。

［1］李洪林，杨波.春兰根状茎离体培养与快速繁殖（简报）.亚热带植物科学［J］，2012，41（4）:67-68.

［2］牛田，张林，王厚新等.春兰‘金荷鼎’杂交后代离体快繁的研究.农学学报［J］，2013（3）:44-46.

［3］孙芳，李承秀，张林等.春兰名品杂交后代快繁与分化研究.中国农学通报［J］，2012，28（10）:189-193.