马齿苋ISSR—PCR反应体系与反应条件的优化

王昭云 那冬晨

摘要 [目的]优化马齿苋ISSR-PCR反应体系与反应条件。[方法]以马齿苋为试验材料，采用改良的CTAB法提取总DNA，对ISSR-PCR引物进行筛选，同时进行ISSR-PCR反应体系和反应条件的优化，电泳检测ISSR-PCR产物。[结果]8个ISSR引物适合马齿苋的ISSR-PCR分析；最适反应体系为总体系25.0 μL，其中2×Taq Platinum PCR Master Mix 12.5 μL，10 μmol/L引物2.0 μL，40 mg/L DNA模板1.0 μL，ddH2O 9.5 μL；最适反应条件为94 ℃预变性360 s；

94 ℃变性60 s，54 ℃退火60 s，72 ℃延伸90 s，30次循环；72 ℃再延伸300 s。[结论]建立了马齿苋ISSR-PCR扩增的最佳反应体系和扩增程序，为进一步研究马齿苋提供基础资料。

关键词 马齿苋；ISSR-PCR；反应体系；反应条件

中图分类号 S647 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2017）13-0147-02

Optimization of ISSR-PCR Reaction System and Reaction Condition of Portulaca oleracea L.

WANG Zhao-yun1，NA Dong-chen1，2 *

（1.Modern College of Arts and Sciences，Shanxi Normal University， Linfen，Shanxi 041000；2.College of Life Sciences，Shanxi Normal University，Linfen，Shanxi 041000）

Abstract [Objective]To optimize ISSR-PCR reaction system and reaction condition of Portulaca oleracea L.[Method]Taking P.oleracea L.as the research object，using improved CTAB method to extract total DNA of P.oleracea L.，the ISSR-PCR primers were screened，at the same time ISSR-PCR reaction system and reaction condition were optimized to test ISSR-PCR products by electrophoresis.[Result]Eight primers were suitable for ISSR-PCRof P.oleracea L..The optimal reaction system was that total reaction system 25.0 μL，including 12.5 μL 2×Taq Platinum PCR Master Mix，2.0 μL 10 μmol/L primers，1.0 μL 40 mg/L DNA templates，9.5 μL ddH2O.The optimal reaction condition was that pre-degeneration at 94 ℃ for 360 s，going to 30 cycles：degeneration at 94 ℃ for 60 s，annealing at 54 ℃ for 60 s，extension at 72 ℃ for 90 s，then extension at 72 ℃ for 300 s after 30 cycles.[Conclusion]The optimizing ISSR-PCR reaction system and reaction condition of P.oleracea L.were established to provide basis for further study P.oleracea L..

Key words Portulaca oleracea L.；ISSR-PCR；Reaction system；Reaction condition

馬齿苋（Portulaca oleracea L.）为马齿苋科马齿苋属一年生草本植物，药食两用[1]。全株无毛，茎紫红色，圆柱形，平卧或斜倚，伏地铺散，叶互生，有时近对生，叶片扁平，肥厚，倒卵形，顶端圆钝或平截，有时微凹，基部楔形，全缘[2]。马齿苋适应性强，适宜在温暖、湿润、肥沃的壤土或沙壤土中生长，耐旱亦耐涝，生于田野路边及庭园废墟等向阳处，国内各地均有分布。

ISSR是在简单重复序列（SSR）基础上发展起来的新型分子标记，由加拿大蒙特利尔大学的Zietkiewicz等[3]提出。ISSR综合了其他分子标记高多态性、可重复性、低成本、易操作以及无需知道基因组序列等优点[4-5]，现已被广泛应用于鉴定种质、分析遗传关系、构建遗传图谱等研究[6]。该研究以马齿苋为试验材料，对影响ISSR-PCR反应体系的各因素进行优化，建立马齿苋ISSR-PCR扩增的最佳反应体系和扩增程序，为进一步研究马齿苋提供基础资料。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料。

马齿苋，采于山西省临汾市汾河公园，该地处于半干旱、半湿润的气候区，属暖温带大陆型气候，冬寒夏热，四季分明，雨热同期。……