副猪嗜血杆菌环介导等温扩增快速检测方法的建立

侯 魁，丁 轲,1b，刘守业，余祖华，赵战勤

(1.河南科技大学 a.河南省动物疫病与公共卫生重点实验室；b.宏翔生物饲料实验室，河南 洛阳 471023；2.大石桥市高坎动物卫生监督所，辽宁 营口 115112)

副猪嗜血杆菌环介导等温扩增快速检测方法的建立

侯 魁1a，丁 轲1a,1b，刘守业2，余祖华1a，赵战勤1a

(1.河南科技大学 a.河南省动物疫病与公共卫生重点实验室；b.宏翔生物饲料实验室，河南 洛阳 471023；2.大石桥市高坎动物卫生监督所，辽宁 营口 115112)

为了建立一种简便、快速、灵敏、特异的副猪嗜血杆菌(Hps)检测方法，以Hps的16S rRNA保守区域片段为靶序列，选择6个特异性区域，设计4条特异性引物F3、B3、FIP和BIP。经优化反应体系、检测灵敏性和特异性，建立Hps的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。研究结果表明：该方法的最优反应体系是引物c(F3)∶c(FIP)或c(B3)∶c(BIP)为1∶4、Mg2+浓度为2 mmol/L、dNTPs浓度为6 mmol/L，最低检出量为0.241 pg/μL DNA。该方法灵敏度是PCR法的100倍，且能够特异性检测出Hps，不能检测出猪链球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、胸膜肺炎放线杆菌和金黄色葡萄球菌。

副猪嗜血杆菌；16S rRNA；环介导等温扩增；灵敏性；特异性

0 引言

副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis，Hps)是猪上呼吸道中常在的一种机会致病菌，在特定条件下能够侵入机体，引发以纤维素性多发性关节炎、脑膜炎和浆膜炎为主要特征的全身性疾病[1]。规模化养殖模式使养殖密度增加，病毒性疾病的流行加重了副猪嗜血杆菌的继发感染，导致仔猪死淘率增加、育肥猪生长性能下降，成为患病猪群的重要继发病原之一[2-3]。因此，建立快速准确的诊断方法，及时采取相应的防治措施是控制副猪嗜血杆菌感染的关键。……