影响紫椴离体培养芽分化因素的研究

徐绍娣+邱金辉+祁永会

【摘 要】选择不同年龄紫椴枝条上的顶芽、侧芽为外植体，对其进行组织培养。采用正交试验法对基本培养基、激素种类与激素浓度进行了筛选，找出影响芽分化的主要因子及最佳组合试验。

【关键词】 离体培养；芽分化；激素；正交设计

[Abstract] The buds and buds of different age were selected as explants and tissue culture was carried out. The basic culture medium， hormone variety and hormone concentration were screened by orthogonal test.

[Key words] culture in vitro；budinitiation；hormone；orthogonal design

紫椴（Tilia amurensis Rupr）是東北林区珍贵阔叶树种之一，木材轻软，富有弹性，是优良胶合板和细木工板的重要原料，花期为最好的蜜源，质白味香是上等蜂蜜，紫椴树冠大，抗烟、抗毒性强，树姿优美又是较好的行道树和庭园绿化树种。东北林区的紫椴红松林是生产力较高的林型之一。多年的大量采伐和利用，已使紫椴种群的数量和质量逐年下降，造成了紫椴资源枯竭，达到了濒危的边缘。为了及时挽救和最快地恢复紫椴资源，应建立紫椴无性系人工林经营体系。而紫椴离体培养是无性繁殖中最重要的技术之一。

1 试验材料与方法

1.1 材料的选取

茎尖：选择25～30a生优树、幼树5～10a年生、实生苗1～2a生超级苗，以及伐根萌生条1～2a枝条的项芽、侧芽为外植体，采条时间为休眠期（10月初～10月末）；深休眠期（1～2月）；萌动初期（4月末～5月初）。

1.2 材料的处理

将初眠枝条或萌生条采用水培至萌动，使芽刚刚吐绿。深休眠枝条放置冰柜数日，然后用水培，培养至芽萌动，将萌动初期的枝条首先经流水冲洗30～60min，然后用70%乙醇棉球擦洗整个枝条，然后剪取1.5～2.0cm长，并带有一个芽的小枝段，再用5%的过氧化氢消毒数分钟，再转入漂白粉饱和液消毒30～40min，之后用无菌水冲洗数次即可接种。接种时将芽1～2层鳞片剥去，剪0.8～1.0cm长接种于培养基，芽基部要接触培养基上。接种茎尖时，先将枝条水培于芽吐绿抽茎3～5mm，在无菌条件下，再切成2～3mm长的茎尖接种，果实先去掉果皮，用水浸1～2d后，浓硫酸浸种20～30min，消毒后去掉果肉，夹取上胚轴做接种材料。

1.3 培养基及培养条件

诱导分化是以改良的MS培养基为基础，附加一定的激动素（KT），外源激素有细胞分裂素6—苄基腺嘌呤（6—BA），玉米素（Zip），生长素有萘乙酸（NAA），赤霉素（GA3）（本文浓度除标明者外一律为mL/L）。继代培养使用改良MS培养基附加6—BA、NAA等，蔗糖为2%。诱导生根采用改良的1/2改良的MS培养基附加IBA、NAA。

1.4 试验设计与测定方法

试验采用正交试验L9（3）4，对基本培养基，激素种类与激素浓度进行了筛选，找出影响分化的主要因素及最佳试验组合，测定指标为分化指数=分化率×分化株数×新梢平均高。

2 试验结果与分析

2.1 激素种类、浓度对芽分化的影响

试验对影响紫椴芽分化的主要因素进行了筛选，采用正交L9（34）法，激素种类为KT、6-BA和GA3，因素水平分别为0.5、1.0和1.5三个水平。

正交试验结果证明，激素6—BA的R值25.64为最大，所以是主要因素，GA3的R值为15.78次之，激动素KT的R值为6.35，因素的主次顺序为6—BA、GA3、KT。如果单项因素分析、KT因素T2为最大值，6—B因素T3为最大值，GA3D因素T1为最大值，因此确定对紫椴胚分化的最佳培养基是改良MS+KT1.0+6-BA3+GA30.5+NAA0.03。为了进一步证实上述试验结果，又进行了正交试验方差分析。结果也证明，只有激素6-BA这一因素以90%的概率保证有显著性差异，因此认为激素6-BA是影响紫椴芽分化的主要因素。

2.2 母树年龄对芽的分化影响

实验选取的采穗母树年龄分别为20～30年、5～8年、1～2年生实生超级苗和1年-2年生萌生条，对上述四种采条母株取芽的培养，在相同的条件下（取材时期、培养基及条件相同），60d调查芽的增殖情况并进行分析发现1～2a生超级苗及萌生条上的芽培养嫩梢增长较快，随着年龄的增加，增殖效应减慢。

2.3 有机附加物对芽的分化影响

为了启动休眠芽的细胞活性，除了采用适宜的细胞分裂素和生长素外，在培养基中附加有机物质，可以起到增强细胞活性的作用，促进芽的分化。附加精氨酸、赖氨酸和谷氨酸都有不同程度的促进作用，分化率分别高于对照25%、12%和8%。

2.4 不同取材时期对芽的分化影响

取材于不同发育阶段的芽，分化率和嫩梢伸长都有所差异。实验采用五个不同时期取材，分别是10月末（初休眠）、1～2月（休眠期）、4～5月（萌动期）、6月初（茎尖）和6月中（茎尖）。实验结果以萌动期（4～5月）不仅分化率高，而且嫩梢伸长较快。其次是6月初取茎尖培养，分化效果也较理想。但到6月中旬后，随着芽的生长，营养物质的消耗，再启动分化也较困难，分化率下降。

3 结论

（1）从芽分化的情况可以看出，激素采用6—BA、KT、GA3效果较好。 （2） 紫椴是生长较快的树种，但幼年时期生长速度甚缓，所以紫椴的芽分化和根生长也都缓慢。（3）1～2a生超级苗及萌生条上的芽培养，嫩梢增长较快，随着年龄的增加，增殖效应减慢。（4）在培养基中附加有机物，能促进芽的分化。（5）在4～5月树木萌动期取的芽分化率高，而且新梢伸长较快，其次是6月初取茎尖培养分化效果较好。