Notch1对肺纤维化小鼠肠黏膜屏障的影响及作用机制研究

郭 慧，刘学军，杜毓锋，郝小燕，张 帆，郭娜娜，林白阳

Notch1对肺纤维化小鼠肠黏膜屏障的影响及作用机制研究

郭 慧，刘学军，杜毓锋，郝小燕，张 帆，郭娜娜，林白阳

目的 探讨Notch1在肺纤维化肠黏膜屏障中的影响及其作用机制。方法 将24只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(N组)、肺纤维化模型组(I组)、肺纤维化+Notch1抑制组(I+D组)。I组、I+D组气管内注入博来霉素造模，I+D组在造模后1周开始腹腔注射Notch1抑制剂DAPT。在造模后28 d全部处死小鼠，取小鼠血液、肺脏、回肠末端10 cm。血液离心后的血清用于ELISA测量丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的含量。右肺、5 cm回肠石蜡包埋后采用HE、Masson染色，并测量肠黏膜、肠绒毛以及肠隐窝的高度。PCR测量左肺、5 cm回肠末端的Notch1mRNA含量。结果 小鼠肺部HE染色、Masson染色、Ashcroft评分提示I组存在明显的纤维化改变，与N组、I+D组比较差异有统计学意义(P<0.05)。I组小鼠肠黏膜厚度、绒毛高度、血清中T-SOD、GSH-PX含量明显低于N组、I+D组，肠道Chiu’s分级、血清MDA的含量明显高于N组、I+D组，差异有统计学意义(P<0.05)。表明IPF小鼠肠黏膜上皮细胞完整性被破坏、黏膜损伤。小鼠肠隐窝深度的测量结果提示I组肠隐窝细胞增生明显高于N组、I+D组，差异有统计学意义(P<0.05)。I组肺组织、肠道组织中Notch1 mRNA的表达高于N组、I+D组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Notch1表达增高促进了肺纤维化的发生，小鼠肺纤维化体内存在肠黏膜的损伤、坏死脱落，Notch1同时可以通过肠上皮隐窝增生介导肠上皮损伤后修复。

肺纤维化；肠黏膜屏障；Notch1；丙二醛；总超氧化物歧化酶；谷胱甘肽过氧化物酶

特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是一种慢性、进行性和致死性恶性间质性肺疾病[1]。一旦确诊，平均生存期3年～5年，且病死率逐年上升，目前病因尚未完全阐明。IPF典型的临床症状是逐渐加重的呼吸困难、低氧血症，而肠黏膜对缺氧十分敏感。Notch1在肺、肠的发育中呈动态表达，并在调控其细胞的分化、增殖、凋亡中起关键作用[2-3]。

1 材料与方法

1.1 实验动物以及分组 24只雄性C57BL/6小鼠，SPF级，体重20 g～25 g。将小鼠按照随机数字表获得的编号按大小分为3组，每组8只。

1.2 要试剂及仪器 博来霉素(15 mg，日本株式会社)；DAPT(美国selleckchem公司)；Masson染色试剂盒(北京索莱宝)；……