柴达木枸杞多糖对UVB诱导HaCaT细胞增殖活性及p16蛋白表达的影响*

任立汆，加杨娥，燕华玲，王 永，郭 砚，王 刚

(青海大学附属医院皮肤科，青海 西宁 810000)

柴达木枸杞多糖对UVB诱导HaCaT细胞增殖活性及p16蛋白表达的影响*

任立汆，加杨娥，燕华玲#，王 永，郭 砚，王 刚

(青海大学附属医院皮肤科，青海 西宁 810000)

目的 观察柴达木枸杞多糖对中波紫外线(UVB)辐射引起的HaCaT细胞活性及对p16蛋白表达水平的影响，以探讨其抗光老化作用与机制。方法 将HaCaT细胞随机分为三组，对照组、UVB组、UVB+枸杞多糖组，以MTS法检测各组细胞增殖活性，以Western blot法检测细胞p16蛋白的表达水平。结果 UVB照射HaCaT细胞后细胞增殖活性下降，p16蛋白表达水平增高(P<0.05)。与UVB照射组相比，枸杞多糖干预后照射组细胞活性上升，p16蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论 柴达木枸杞多糖有抗光老化作用，其机制可能是通过抑制UVB引起的HaCaT细胞增殖活性下降以及p16蛋白表达增加实现。

中波紫外线 人永生角质形成细胞 枸杞多糖 细胞 增殖活性 p16蛋白表达

现代研究认为，枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide，LBP)具有抗光老化、抗衰老等作用，主要的研究集中在其抗氧化及抑制凋亡等方面[1-3]，且有不同结论。本研究拟通过观测柴达木枸杞多糖对UVB辐射后HaCaT细胞活力及p16蛋白表达的影响，来探讨其抗光老化作用及机制。

1 材料与方法

1.1 主要仪器和试剂

HaCaT细胞株(南京凯基生物科技发展有限公司)。枸杞(青海柴达木)。TL20W/12 紫外线UVB灯管(飞利浦)；UVB辐照度监示器(台湾路昌)；X-Mark型BIO-RAD酶标仪(BIO-RAD公司)。BCA蛋白测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)；P16(Abcam，ab51243)单克隆抗体(英国Abcam公司)；β-actin抗体(英国Abcam公司)。HRP 标记鼠抗兔抗体(北京普利莱基因技术有限公司)；ECL化学发光检测试剂盒(北京Solarbio科技有限公司)； 辣根过氧化物酶山羊抗兔IgG二抗(北京普利莱基因技术有限公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 HaCaT 细胞的培养

以含10%胎牛血清的DMEM为培养基，置于37 ℃、5% CO2饱和湿度的培养箱中，当细胞达90%融合时传代铺96孔板及6孔板用于实验。……