A型产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶Cp51的原核表达及活性检测

吕梦娜，龙航宇，王丽梅，唐 陶，陈冰冰，林瑞庆

(华南农业大学 兽医学院/广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室，广东 广州510642)

A型产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶Cp51的原核表达及活性检测

吕梦娜，龙航宇，王丽梅，唐 陶，陈冰冰，林瑞庆

(华南农业大学 兽医学院/广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室，广东 广州510642)

【目的】原核表达A型产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶Cp51并研究其对A型产气荚膜梭菌Clostridium perfringens的体外抗菌活性。 【方法】合成噬菌体裂解酶Cp51基因，并构建了pET-32a-Cp51原核表达载体，转化到大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3)，经终浓度为0.5 mmol·L–1的IPTG诱导以及镍柱纯化后，获得了可溶性的Cp51重组蛋白；用比浊法检测Cp51重组蛋白的杀菌活性。 【结果】噬菌体裂解酶Cp51重组蛋白能够有效降低7株A型产气荚膜梭菌的浊度，裂解酶质量浓度在5 μg·mL–1以上、作用30 min对A型产气荚膜梭菌的杀菌率可达到99.99%以上，而对其他种类细菌无杀菌效果。 【结论】A型产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶Cp51重组蛋白对

A型产气荚膜梭菌有较强的体外杀菌活性和特异性，研究结果为后续裂解酶Cp51的临床应用奠定基础。

产气荚膜梭菌；噬菌体；裂解酶；蛋白表达；杀菌活性

产气荚膜梭菌Clostridium perfringens又名魏氏梭菌C. welchii，是一种重要的人畜共患病原菌[1]。产气荚膜梭菌为两端钝圆厌氧性菌，呈粗杆状，单个或成对存在，是一种能产芽孢的革兰阳性菌，在人和动物的肠道内普遍存在，也广泛分布于污水、土壤等自然环境中。根据产气荚膜梭菌产生的4种主要外毒素，可将产气荚膜梭菌分为A、B、C、D和E 型，其中A型产气荚膜梭菌是引发人类气性坏疽及家禽坏死性肠炎的主要病原[2]。……