STAT3蛋白真核表达载体的构建及其泛素化功能研究

李夏莹+张秀杰+宋贵文

摘要：为研究信号转导与转录激活因子3（STAT3）的活性调控机制，克隆人源STAT3基因，并将其构建在真核表达载体上。之后，通过细胞内共表达STAT3和泛素化质粒的方法，验证了STAT3蛋白可以发生多种类型的泛素化修饰。结果表明，K63位非降解功能的泛素化影响STAT3蛋白的磷酸化，从而影响STAT3的活性及功能的发挥；而K48位降解功能的泛素化影响STAT3蛋白的降解，使STAT3蛋白得以更新，这2种类型的泛素化对STAT3蛋白及其功能都十分重要。

关键词：STAT3蛋白；表达载体；泛素化；K63；K48

中图分类号： Q78文献标志码： A文章编号：1002-1302（2017）11-0016-03

化[5]。信号转导与转录激活因子家族（STAT）已发现7个成员，STAT3是该家族的研究热点，且敲除该基因可以使胚胎死亡，说明该基因是不可或缺的。磷酸化修饰是调控STAT3活性的主要方式，Tyr705、Ser727是磷酸化的关键氨基酸位点[6]。此外，STAT3的Lys685可以在组蛋白乙酰转移酶的修饰下发生可逆乙酰化[7-8]。

在真核细胞中，蛋白质的泛素化和磷酸化是最常见的翻译后修饰。细胞外信号严格调控着蛋白的泛素化，在很多情况下，这种调控依赖于蛋白质的磷酸化[9]。磷酸化通过修饰泛素化的底物，或者修饰泛素化机器的某个组分来影响泛素化。此外，泛素化对于磷酸化和信号分子的传递也有一定的作用。本研究通过研究STAT3蛋白是否会发生泛素化，发生哪种类型的泛素化，并以此解释泛素化与STAT3活性之间的关系。

1材料与方法

1.1试验材料

Taq DNA polymerase，购自北京鼎国生物技术有限公司；T4 DNA连接酶、pMD-19-T simple Vector、DNA酶Ⅰ、Oligo（dT）18、Random promers、PrimeScript RT reagent Kit和SYBR Premix Ex TaqTM（Perfect Real Time）Kit，购自TaKaRa公司；dNTPs，购自北京盛旭百川生物科技有限公司；……