基于SOE-PCR的核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70的构建及免疫效果研究

赵佳琪，王婉莹，范业宁，马春平，张东红，吕 扬，赵 臣

(吉林医药学院检验学院，吉林吉林 132013)



基于SOE-PCR的核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70的构建及免疫效果研究

赵佳琪，王婉莹，范业宁，马春平，张东红，吕 扬，赵 臣△

(吉林医药学院检验学院，吉林吉林 132013)

目的 构建pIRES2-MLAA34-HSP70重组质粒，并检测其免疫效果。方法 采用逆转录PCR(RT-PCR)的方法提取急性单核细胞白血病相关抗原基因MLAA-34和热休克蛋白(HSP)70基因，设计特异性重叠引物，以重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术扩增MLAA34-HSP70融合基因，构建核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70。将核酸疫苗免疫BALB/c小鼠，检测小鼠脾淋巴细胞对U937细胞的杀伤作用及小鼠脾细胞悬液中白细胞介素(IL)-2、IL-4和γ干扰素(IFN-γ)水平。结果 扩增出MLAA34-HSP70融合基因2 956 bp，成功构建了核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70，经鉴定与预期结果一致；脾淋巴细胞杀伤活性结果显示，核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70对U937细胞的杀伤效率明显高于其他实验组及对照组(P<0.01)；核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70组细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ水平亦明显高于其他实验组及对照组(P<0.01)。结论 成功构建了pIRES2-MLAA34-HSP70核酸疫苗，该核酸疫苗能诱发强烈的体液免疫，增强机体对肿瘤细胞的免疫应答，对MLAA34阳性细胞具有特异性杀伤作用。

疫苗，DNA；重叠延伸PCR；白血病，单核细胞，急性；MLAA-34；热休克蛋白质类70

核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因导入动物体细胞内，并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答反应，以达到预防和治疗疾病的目的[1]。抗原表位基因是核酸疫苗的核心部分，以融合基因为目的基因构建核酸疫苗已是业界的共识。将相同或相似功能的基因融合，可以增强目的蛋白的免疫原性，提高核酸疫苗的免疫保护效应。重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)采用互补末端引物，使PCR产物形成重叠链，从而将来源不同的多个基因片段拼接在一起[2]。利用SOE-PCR技术不需要内切酶消化和连接酶处理即可进行有效的基因重组，因而在构建融合基因、定点突变及基因敲除等方面有着广泛的应用[3]。……