rhG-CSF包含体处理工艺改进

刘建飞+匡瑾瑾+傅晖

摘 要 通过使用管式离心机替代转子离心机对rhG-CSF（赛格力）包含体处理工艺进行改进，使4个亚批次处理的包含体合并为1个批次进行处理，操作时间缩短4倍。通过改进前后的质量对比研究发现，本工序变性蛋白的纯度、内毒素及残余DNA与原工艺相比均无明显差异，且符合企业质量要求，而人工和动力成本下降了75%。

关键词 包含体 rhG-CSF 变性蛋白

中图分类号：TQ464.7 文献标识码：A 文章编号：1006-1533（2017）15-0075-04

Process improvement of inclusion-body of rhG-CSF

LIU Jianfei*， KUANG Jinjin， FU Hui

（Shanghai Sunway Biotech Co.， Ltd.， Shanghai 201206， China）

ABSTRACT An improved process for the treatment of rhG-CSF inclusion body was established by using tubular centrifuge instead of rotor centrifuge， which could make 4 sub-batches treatment of inclusion bodies in the original process into only one and total operation time be reduced to one fourth. It was found that the purity of denatured protein and the contaimination of endotoxin and residual DNA in the improved process was comparable to those in the original process and the quality could meet the requirements of enterprises while the costs of labor and power could be reduced by 75%.

KEY WORDS inclusion body； rhG-CSF； denatured protein

人粒细胞集落刺激因子是一个小的弱酸性蛋白，分子量为18.8 kD。重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）为利用基因重组技术通过工程菌的发酵生产的，与天然产品相比，生物活性在体内、外基本一致。rhG-CSF是调节骨髓中粒系造血的主要细胞因子之一，选择性作用于粒系造血祖细胞，促进其增殖、分化，并可增加粒系终末分化细胞的功能[1]。它对于治疗由肿瘤放化疗、骨髓移植所引起的粒细胞减少症具有显著疗效[2-4]

赛格力（SunGran）为我们公司生产的重组人粒细胞集落刺激因子注射液的商品名，是以大肠埃希氏菌为表达载体，表达的rhG-CSF以包含体[5]形式存在与大肠埃希氏菌细胞质中，须经细胞破碎后收集包含体，再经包含体处理、复性、纯化，制备成赛格力原液[5-7]。

包含体处理一般采用多种缓冲液对其进行洗涤，最后用高浓度变性剂（6 mol/L盐酸胍或8 mol/L尿素）对其进行溶解。由于包含体难溶解和密度的特异性，缓冲液洗涤后，都用离心机来进行固液分离，重新收集包含体[8-11]。目前广泛运用的转子离心机由于处理量小，效率较低。……