人巨细胞病毒微小RNA miR-US4-5p靶向抑制PAK2的表达

邵耀中,齐 莹,郭 鑫,蒋树娟,黄郁晶,柳中洋,阮 强,解立怡

(西安交通大学第一附属医院肾脏内科,陕西 西安 710061;*通讯作者,E-mail:275573101@qq.com)

人巨细胞病毒微小RNA miR-US4-5p靶向抑制PAK2的表达

邵耀中,齐 莹,郭 鑫,蒋树娟,黄郁晶,柳中洋,阮 强,解立怡*

(西安交通大学第一附属医院肾脏内科,陕西 西安 710061;*通讯作者,E-mail:275573101@qq.com)

目的 寻找人巨细胞病毒微小RNA miR-US4-5p调控的靶mRNA,检测miR-US4-5p对靶mRNA PAK2蛋白质表达的调节作用。 方法 采用Hybrid-PCR方法及Targetscan软件分析从人巨细胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞总RNA中筛选候选靶mRNA;应用荧光素酶实验,通过构建PMIR-PAK2报告基因,将其和miR-US4-5p、miRNA阴性对照共转染到HEK293细胞中,验证miR-US4-5p与候选靶mRNA的结合能力;应用Western blot方法,通过将miR-US4-5p、miRNA阴性对照分别转染到HEK293细胞、HELF细胞、THP-1细胞中,验证转染miR-US4-5p对靶mRNA蛋白质表达的调节作用。 结果 通过Hybrid-PCR方法及Targetscan筛选出12个miR-US4-5p的待选靶mRNA;荧光素酶实验表明:与转染miRNA阴性对照相比,转染miR-US4-5p可以显著地下调PMIR-PAK2的荧光素酶活性,从而验证了miR-US4-5p与PAK2的结合性,在HEK293细胞、HELF、THP-1细胞中PAK2可以被过表达的miR-US4-5p造成不同程度的下调。 结论 人巨细胞病毒表达的miR-US4-5p在三种不同细胞系中具备抑制PAK2蛋白质表达的能力。

人巨细胞病毒; 微小RNAs; p21激活激酶

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是一种普遍存在的β-疱疹病毒。在免疫力低下的患者中,有较高的发病率和死亡率[1]。人巨细胞病毒具有230 kb的基因组,编码来自16个前体的至少26个成熟miRNA[2]。miRNA对它们靶mRNA的转录后调控被认为是通过miRNA 5′末端的2-7个核苷酸(被称为种子区)和位于mRNA 3′非编码区的结合位点之间的结合来实现。这种结合导致所涉及的靶mRNA的翻译抑制和降解[3]。……