先天性巨结肠症SEMA3C/3D基因突变抑制肠神经嵴细胞的分化和成熟

姜 茜,蔚开慧,张 震,李 颀,肖 萍,苏 琳,李 龙,潘尚领

(1首都儿科研究所遗传研究室,儿童发育营养组学北京市重点实验室,北京 100020;2广西医科大学基础医学院病理生理学教研室;3首都儿科研究所附属儿童医院普通外科;4首都儿科研究所附属儿童医院病理科;5安徽医科大学;*通讯作者,E-mail:teaco@126.com)

先天性巨结肠症SEMA3C/3D基因突变抑制肠神经嵴细胞的分化和成熟

姜 茜1*,蔚开慧2,张 震3,李 颀3,肖 萍4,苏 琳5,李 龙3,潘尚领2

(1首都儿科研究所遗传研究室,儿童发育营养组学北京市重点实验室,北京 100020;2广西医科大学基础医学院病理生理学教研室;3首都儿科研究所附属儿童医院普通外科;4首都儿科研究所附属儿童医院病理科;5安徽医科大学;*通讯作者,E-mail:teaco@126.com)

目的 观察先天性巨结肠症(hirschsprung disease, HSCR)患者携带的SEMA3C/3D基因错义突变编码蛋白对原代培养的肠神经嵴细胞(enteric neural crest cell, ENCC)分化、成熟和迁移的影响。 方法 分别用野生型(wild type, WT)和突变型SEMA3C/3D质粒瞬时转染HEK293T细胞获取上清液,用含0.5 nmol/ml相应蛋白的上清液处理ENCC 72 h,分别用神经元、胶质细胞和未成熟神经元特异性标志物(Peripherin、GFAP、MASH1)多重免疫荧光染色法检测处理后细胞的分化倾向和分化后神经元的成熟速度,用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力的变化。 结果 与WT相比,突变型SEMA3C(S329G、V337M)处理组的ENCC分化为神经元和成熟神经元的能力均下降(WT, S329G, V337M组的Peripherin/GFAP比值分别为0.95±0.34, 0.53±0.35, 0.28±0.07;Peripherin/MASH1比值分别为1.14±0.17, 0.95±0.38, 0.60±0.19),其中以V337M突变型SEMA3C处理组的下降最为明显(P<0.01),而野生型和突变型SEMA3C/3D对神经球的迁移均没有明显影响。 结论 突变型SEMA3C可以抑制ENCC分化为神经元/成熟神经元,从而影响肠神经系统的正常发育,这可能为HSCR的发病机制研究提供新的线索。

先天性巨结肠症;SEMA3C/3D; 肠神经嵴细胞; 细胞分化

先天性巨结肠(Hirschsprung disease, HSCR)是造成新生儿及婴幼儿肠梗阻的常见原因之一,又称肠无神经节细胞症(congenital aganglionosis),发病率约为1/5 000,男性高于女性[1]。……