卵巢癌细胞自噬后4种miRNAs表达变化及miR-144对mTOR的靶向调控作用

盛红娜，王艳丽，吴璠，赵采云，李晶

(天津医科大学第二医院，天津300211)

·基础研究·

卵巢癌细胞自噬后4种miRNAs表达变化及miR-144对mTOR的靶向调控作用

盛红娜，王艳丽，吴璠，赵采云，李晶

(天津医科大学第二医院，天津300211)

目的 观察雷帕霉素诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬后miR-18a、miR-19a、miR-21及miR-144表达的变化，并以miR-144为研究对象，验证其对自噬相关基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(mTOR)的靶向调控作用。方法 分别用50 ng/mL雷帕霉素(雷帕霉素组)及10 nmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA组)作用于SKOV3细胞2、12 h，收集细胞，并设立不进行任何处理的细胞作为对照组，提取总RNA;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测4种miRNAs的表达水平。培养SKOV3细胞，设立正常细胞组、miR-144 mimic组和miR-144 inhibitor组，分别将合成的miR-144 mimic及miR-144 inhibitor转染到SKOV3细胞内，正常细胞组不处理。应用qRT-PCR方法检测各组的miR-144及mTOR mRNA表达量，应用Western blotting法检测各组细胞中mTOR蛋白表达量。应用双荧光素酶报告系统验证miR-144与mTOR的相互作用关系。结果 对照组细胞miR-18a、miR-19a、miR-21及miR-144的表达量分别为1.003±0.021、1.001±0.039、1.014±0.016、1.028±0.037；雷帕霉素组4种miRNAs的表达量分别为6.310±0.025、1.200±0.058、52.310±0.005、63.490±0.024，其miR-18a、miR-21及miR-144高于对照组(P均<0.05)；3-MA组SKOV-3细胞的4种miRNAs的表达量分别为0.540±0.019、0.890±0.062、0.820±0.012和0.660±0.003，其miR-18a及miR-144低于对照组(P均<0.05)。与正常细胞组比较，miR-144 mimic组miR-144 mRNA表达量高(P<0.05)，mTOR mRNA和蛋白的表达量降低(P均<0.05)；miR-144 inhibitor组miR-144表达量下降(P<0.05)，mTOR mRNA和蛋白的表达量升高(P均<0.05)。miR-144 mimic分别与mTOR-WT及mTOR-Mut共转染，前者的荧光表达量低于后者(P均<0.05)。结论 SKOV3细胞发生自噬后，miR-18a、miR-21及miR-144表达升高， miR-144可靶向抑制mTOR的表达。

卵巢肿瘤；微小RNA-144；丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶；细胞自噬

卵巢癌是目前最为常见的女性生殖系统三大恶性肿瘤，高于70%的患者确诊时已属晚期，是目前病死率最高的妇科肿瘤[1]。该病易转移、易复发，且对化疗易产生耐药，其疗效及远期预后较差，5年生存率仅为30%左右[2]。微小RNA(miRNA)是一类内源性的非编码小分子RNA，其主要在基因转录后水平对靶基因进行调控，影响众多重要的生物学过程。目前已证实miRNA与多种肿瘤的发病密切相关。自噬是一种高度保守的，可使溶酶体降解的生物学代谢过程，该过程主要通过吞噬自身细胞质蛋白或细胞器，并与溶酶体融合形成自噬溶酶体，进而降解其所包裹的内容物,使得某些肿瘤细胞凋亡或对抗自身环境来逃避凋亡[3]。……