小菜蛾moricin在毕赤酵母中的表达及抑菌活性分析

黄钦耿，梁 玲，陈巧红，吴松刚，黄建忠*

小菜蛾moricin在毕赤酵母中的表达及抑菌活性分析

黄钦耿，梁 玲，陈巧红，吴松刚，黄建忠*

（福建师范大学生命科学学院，工业微生物教育部工程研究中心，福建 福州 350108）

抗生素的过度使用给自然生态带来诸多不利影响，寻找合适的抗生素的替代物，从而减少抗生素的使用正成为当下的研究热点。以来自于小菜蛾的特异性抗菌肽moricin为研究对象，研究其酵母异源表达水平和抑菌性能及生化特性，为进一步的开发利用提供理论支持。根据已有的小菜蛾抗菌肽moricin特异性基因信息，采用聚合酶链式反应扩增其成熟肽基因mor-3，并克隆至pGAPZα A质粒中，构建组成型分泌表达载体pGAPZα A-mor3，线性化片段电转化导入毕赤酵母SMD1168菌株，高质量浓度Zeocin筛选获得高拷贝重组转化子。以yPD为培养基进行摇瓶发酵，重组蛋白获得高效表达，分子质量约为5 kD，与理论预测的基本一致；发酵60 h，上清液中重组蛋白表达量达248.98 mg/L，而且耐热性能良好，同时具备较强的耐强酸及强碱的能力，特别在强酸环境中活性保持稳定，体现了较好的机体内环境的适应性潜力；对部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有抑菌作用，特别是对革兰氏阴性菌具备特异性较强的抑制作用，对大肠杆菌的最低抑菌浓度为6.25 μg/mL，而对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度仅为124.49 μg/mL。独特的抑菌性能和理化特点，使其具备广阔的开发应用前景及良好的社会与环保效益。

抗菌肽；moricin；毕赤酵母；高效表达；……