卵泡刺激素功能肽与受体胞外区不同片段结合作用的分析

赵婷，席欧彦，秦瑞坪，邱玲玲，马晓玲，李江伟

(新疆大学生命科学与技术学院 新疆生物资源基因工程重点实验室，乌鲁木齐 830046)

卵泡刺激素功能肽与受体胞外区不同片段结合作用的分析

赵婷，席欧彦，秦瑞坪，邱玲玲，马晓玲，李江伟

(新疆大学生命科学与技术学院 新疆生物资源基因工程重点实验室，乌鲁木齐 830046)

【目的】卵泡刺激素(FSH)33-53肽可以与FSH受体(FSHR)结合,并激活下游信号，被作为FSH功能肽。然而其在受体上的具体结合位置还不清楚。阐明FSH33-53肽在FSHR上的结合区域，为基于FSH的疫苗设计提供依据。【方法】采用重组的FSHR 胞外区(ECD)和富含亮氨酸区(LRR)及合成的FSHR9-30区分析这些FSHR的功能区域与FSH33-53的结合作用。PCR扩增得到hFSHR ECD和hFSHR LRR目的基因，构建重组质粒pET22b-FSHR-ECD和pET22b-FSHR-LRR，表达纯化获得蛋白FSHR-ECD和FSHR-LRR。采用多肽合成法获得FSHR9-30-KLH。通过ELISA方法检测受体片段与FSH33-53肽的结合和亲和力。【结果】获得FSHR-ECD和FSHR-LRR蛋白，其相对分子质量(Mr)分别为43和32kDa。在受体为0.5 μgmL，配体为2.5 μgmL时，三种蛋白均与FSH33-53肽结合。ELISA检测受体与配体的亲和力分别为0.21×10-6、0.45×10-6和0.056×10-6mol/L 。【结论】FSHR 9-30片段与FSH33-53肽的结合较其它两个片段结合力强。

FSH33-53肽；LRR；FSHR9-30肽；胞外区；亲和力

0 引 言

【研究意义】卵泡刺激素(Follice stimulating hormone, FSH)属于腺垂体分泌的糖蛋白激素，其作用是促进卵泡生长和成熟，也是治疗不孕症的常用药物[1-2]。卵泡刺激素受体(Follicle stimulating hormone receptor，FSHR)为七次跨膜受体，属于G蛋白偶联受体超家族成员。FSHR有695个氨基酸组成，分别有胞外区(extracellular domain，ECD)、胞内区(intracellular domain，ICD)和跨膜区组成。只有受体与配体结合才能对生理功能产生一定的作用，测定配体与受体亲和力的结合实验是药物评价、研发和作用机理研究中不可缺少的部分[3]。……