测定比沙可啶肠溶片含量的测量不确定度

王书学

【摘要】 目的 分析采用超高效液相色谱（UPLC）测定比沙可啶肠溶片含量的测量不确定度。方法 采用外标法， 应用UPLC测定比沙可啶肠溶片中比沙可啶的含量， 并建立数学模型评估其测量不确定度。结果 UPLC外标法测定得到的比沙可啶肠溶片的含量为98.8%， 置信概率为95%， 扩展测量不确定度为2.5%， 测量结果表示为（98.8±2.5）%， K=2。结论 含量测定的过程中应严格控制仪器的状态， 特别是对照品的称量过程， 另外也应该建立测量不确定度的评估， 对于保证实验的精准度极其重要。

【关键词】 比沙可啶；超高效液相色谱；测量不确定度

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.21.114

比沙可啶肠溶片通过与肠黏膜直接接触刺激其感觉神经末梢增强肠反射性蠕动促进排便， 临床主要用于治疗急、慢性便秘和习惯性便秘， 被收录于2015版《中国药典》中[1]。《中国药典》中对于比沙可啶肠溶片的含量测定是采用紫外-可见光光度法， 吸收波长为264 nm[2]。作者本次通过UPLC来对其含量进行测定， 并测定其含量的测量不确定度。UPLC借助于高效液相色谱的理论及原理， 涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术， 增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量[3]。本研究中作者依次建立数学模型、分析不确定度来源以及计算不确定度分量、合成标准不确定度和扩展不确定度的过程， 对UPLC外标法测定比沙可啶肠溶片含量的测量不确定度进行评定。

1 仪器与试剂

1. 1 仪器 Waters ACQUITY UPLC I-Class 超高效液相系统， 包括PDA检测器， 四元高压泵等；分析天平：梅特勒-托利多公司XS 十万分之一分析天平；色谱柱：Waters BEH C18；A级50 ml量瓶。

1. 2 试剂 比沙可啶对照品由中国食品药品检定研究院购买， 批号为10081-200402， 纯度为100.0%；比沙可啶肠溶片由A公司提供， 批号为20160821， 规格为5 mg；乙腈为美国费歇尔公司色谱纯乙腈；乙酸铵和冰乙酸由国药集团化学试剂有限公司购买；水为实验室自制超纯水。

2 方法

2. 1 色譜条件与系统适用性 流动相A为乙腈， 流动相B为乙酸铵溶液[20 mmol/L， 用冰乙酸调节pH至（5.0±0.2）]， 洗脱比例为A∶B=55∶45， 柱温为40℃， 样品室温度为15℃， 流速0.4 ml/min， 检测波长265 nm， 进样量10 μl。在上述色谱条件下， 比沙可啶峰与相邻杂质峰的分离度>1.5， 满足系统适用性要求。

2. 2 样品配制

2. 2. 1 对照品溶液 精密称取比沙可啶对照品适量置于50 ml量瓶中， 加冰乙酸-乙腈-水（4∶30∶66， V/V/V）溶解， 并制成1 ml中约含0.2 mg的比沙可啶对照品溶液。

2. 2. 2 供试品溶液 取比沙可啶肠溶片20片， 精密称定后置于碾钵中碾成细粉， 精密称取细粉适量（约相当于比沙可啶10 mg）置于50 ml量瓶中， 加冰乙酸-乙腈-水（4∶30∶66， V/V/V）溶解并定容， 摇匀， 溶液过0.2 μm微孔滤膜后， 取续滤液作为供试品溶液， 平行配置2份。

2. 2. 3 空白辅料溶液 精密称取生产工艺中的所有辅料适量， 并按“2.2.2供试品溶液”项下的方法配置成空白辅料溶液。

2. 3 样品含量测定 分别取“2.2” 项下的对照品溶液和供试品溶液10 μl， 注入UPLC仪， 按“2.1”项中的色谱条件各进样2针进行分析， 记录色谱图中相应的峰面积， 求各自的平均值， 按外标法计算含量。结果， 比沙可啶肠溶片的含量为98.8%。

3 测量不确定度评价

3. 1 建立数学模型 根据含量测定的原理和测试过程可知， 比沙可啶肠溶片中比沙可啶的含量计算公式为：

式中， Y代表供试品中比沙可啶的标示百分含量；A1、A2分别代表供试品的峰面积和对照品的峰面积；W1、W2分别表示供试品的称样量和对照品的称样量；V1、V2分别代表供试品溶液的稀释体积和对照品溶液的稀释体积；P2代表对照品的纯度；W—代表供试品平均片质量；标示量为5 mg/片。因此可知， 比沙可啶肠溶片中比沙可啶含量测定的测定不确定度来源有：对照品的纯度、对照品及供试品称样量、对照品及供试品的稀释体积、对照品及供试品的峰面积、供试品平均片重量。

3. 2 测量不确定度评价结果 根据JJF1059.1-2012规程《测量不确定度评定与表示》[4]、《常用玻璃仪器检定规程》[5]等标准对本次研究涉及到的不确定度类型及相对标准不确定度进行评估。结果见表1。由表1可以得知比沙可啶肠溶片含量的测量不确定度Uc（X）=98.8%×1.26×10-2。因测量结果符合正态分布， 置信概率取为95%， 包含因子K=2， 则U=2×1.26%=2.5%。因此可知X=（98.8±2.5）%， K=2。

4 小结

从含量测定的整个过程可以看出测量不确定度主要来源于对照品的称量过程， 因此要是想提高比沙可啶肠溶片中比沙可啶含量的测量准确度就应该尽可能从对照品的称量上提高准确度， 分析天平应经过计量并做好日常维护， 称量室应保证温湿度适宜， 称量前应用标准砝码对天平的精准度进行检验。

综上所述， 要想提高此类实验的准确度， 实验过程中的所有仪器都应该经过计量院校准， 并在仪器所适宜的温湿度下进行实验。另外也要在进行方法验证的基础上建立测量不确定度的评估， 这对于保证实验的精准度极其重要。

参考文献

[1] 张西如， 孙婷， 郭永辉， 等. 比沙可啶原料药和肠溶片中有关物质测定方法研究. 中国药房， 2016， 27（21）：2995-2997.

[2] 国家药典委员会. 中国药典（二部）.北京：中国医药科技出版社， 2015.

[3] 毕晓黎， 罗文汇， 李素梅， 等. 超高速液相测定西洋参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量研究. 中国药师， 2012， 15（5）： 651-652.

[4] 全国计量标准、计量检定人员考核委员会组. 测量不确定度评定与表示实例. 中国计量出版社， 2001.

[5] 罗正华， 李少旦. 常用玻璃量器检定的测量不确定度评定. 中国卫生检验杂志， 2007， 17（8）：1505-1506.

[收稿日期：2017-03-09]endprint