猪圆环病毒2型Cap蛋白的纯化与鉴定

周景明,贾 蕊,刘红亮,祁艳华,聂守一,陈 冰,张改平,王爱萍

(郑州大学生命科学学院，河南郑州 450001)

猪圆环病毒2型Cap蛋白的纯化与鉴定

周景明,贾 蕊,刘红亮,祁艳华,聂守一,陈 冰,张改平,王爱萍*

(郑州大学生命科学学院，河南郑州 450001)

为了获得具有良好免疫原性的猪圆环病毒2型重组Cap蛋白，对pET-28a-ORF2-BL21重组菌种进行IPTG诱导表达，利用镍亲和层析法纯化可溶性重组蛋白，并利用Western blot和ELISA鉴定其免疫反应性。结果表明，表达的重组蛋白分子质量约为 26 ku，主要以可溶性蛋白的形式存在，纯化后的蛋白纯度可达到 90%以上，浓度为1.31 mg/mL，产量为30.6 mg/L菌液。Western blot和间接ELISA证实,重组蛋白能够与PCV2阳性血清反应。结果表明，所制备的Cap蛋白具有较高的纯度和较好的免疫反应性，有望用于PCV2抗体检测免疫试纸的研制。

猪圆环病毒2型；核衣壳蛋白；蛋白纯化；鉴定

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)是仔猪断奶后多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)的主要病原，20世纪90年代早期Allan G M等从患有PMWS的病猪体内分离出PCV2。PCV2有3个主要的开放阅读框(open reading frame，ORF)，分别是ORF1(945个核苷酸，51-995位)，ORF2(702或705个核苷酸，位置是1734/1735-1030/1033/1034)和ORF3(315个核苷酸，671-357位)[1]。其中，ORF2编码病毒的核衣壳蛋白，即Cap蛋白[2]。Cap蛋白由233个或234个氨基酸组成，分子质量约为28 ku[3]。Cap蛋白是病毒的主要结构蛋白和主要的免疫原性蛋白，在病毒感染免疫反应中起着重要作用，包含病毒主要的抗原表位，具有良好的免疫原性，是刺激机体产生免疫应答的重要抗原，在流行病学诊断及疫苗学研究中起到关键作用[4-5]。因此，Cap蛋白是构建重组疫苗和临床检测的首选蛋白[6]，在PCV1和PCV2之间不存在抗原交叉反应[7]。……