紫外分光光度法测定南天竹茎、叶多糖含量

何 勇，周 婷，陈仕云

(1.合肥华方医药科技有限公司，安徽 合肥 230088；2.合肥学院 化学与材料工程系，安徽 合肥 230601；3. 合肥学院 分析测试中心，安徽 合肥 230601)

紫外分光光度法测定南天竹茎、叶多糖含量

何 勇1，周 婷2，陈仕云3*

(1.合肥华方医药科技有限公司，安徽 合肥 230088；2.合肥学院 化学与材料工程系，安徽 合肥 230601；3. 合肥学院 分析测试中心，安徽 合肥 230601)

以葡萄糖为标准样品，用紫外分光光度法测定南天竹茎、叶多糖含量，并考察了不同浓度的乙醇、不同提取温度对多糖含量的影响。结果表明，该方法操作简单，重复性好，结果准确可靠，可用于南天竹茎、叶多糖含量测定。

紫外分光光度法；南天竹；多糖

多糖普遍存在自然界植物体中，被认为非特异性免疫调节剂，可激活肌体的免疫活性细胞，并且在保肝、抗肿瘤、降血糖、降血脂、降胆固醇、以及促进胃溃疡愈合等方面具有显著的疗效。经过大量文献调研发现关于南天竹果实、茎、叶多糖成分研究未见报道。同时经过预试验后发现南天竹茎、叶含有该类成分，为了进一步全面开发利用南天竹，现对其多糖的含量进行研究[1]。

南天竹( Nadina domestica Thunb) 为小檗科南天竹属常绿观赏小灌木，其根、茎、等均可入药。根、茎、叶味苦、性寒，有祛风、清热、除湿、化痰等功能; 果实味酸甘、性平，有敛肺止咳、清肝明目之功能。南天竹含有生物碱、黄酮、木质素、多糖等活性成分，赵琳等报道叶、整个植株挥发性成分的化学成分[2]。

1 仪器与试药

V-650型紫外一可见分光光谱仪(日本JASCO公司)， BP211D型十万分之一电子天平(Sartorius)；离心机，烘箱，超声仪，乙醇(华东医药股份有限公司)，浓硫酸，苯酚，葡萄糖；所用试剂均为分析纯。

药材来源：南天竹茎、叶釆于合肥大蜀山，经安徽中医药大学药学院吴德玲教授鉴定为小檗科南天竹属植物南天竹( Nadina domestica Thunb)的茎、叶 。

2 试验方法和结果

2.1 5%苯酚溶液的配制

取苯酚50 g，加铝片0.5 g和碳酸氢钠0.025 g，常压蒸馏，收集182 ℃馏分。称定该馏分5 g，置100 mL棕色容量瓶(苯酚见光易分解，不能用透明容量瓶)中，加去离子水至刻度线，摇匀后，置于冰箱中冷藏储存备用。

2.2 样品溶液的制备

分别取南天竹茎和叶粗粉，置于索氏提取器中，加石油醚回流提取，滤渣挥干。取适量滤渣用蒸馏水回流提取，过滤，浓缩，加入无水乙醇使溶液含乙醇体积分数至80%，静止过夜，离心得沉淀，70℃真空干燥即得南天竹茎和叶粗多糖[3-5]。

取上述粗多糖加蒸馏水溶解后，用Sevage试剂除去蛋白质后，以醇沉法加入乙醇溶液使溶液含乙醇体积分数至80%，冰箱中静置冷藏24 h，静止过夜，离心得沉淀，70℃真空干燥即得南天竹茎和叶多糖[1]。

2.3 对照品溶液的配制

取105 ℃ 干燥至恒重的葡萄糖101.8 mg，精密称定，置于100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 测定波长的选择[6-7]

分别取南天竹样品溶液和葡萄糖标准溶液各1mL，分别加入质量分数为5%苯酚溶液1.0 mL、浓硫酸(质量分数95%～98%) 5.0 mL，摇匀后置于沸水中加热15min，冷却至室温。分别在紫外分光光度计上于200～750 nm范围内进行全波长扫描，结果对照品与样品溶液在490nm处均有最大吸收，且试剂空白和不加显色剂的样品溶液在490 nm处均无吸收，故确定490 nm为检测波长。结果见图1、图2。

图1 葡萄糖对照品紫外扫描图

Fig.1 The UV scanning figure of reference substance

图2 南天竹茎样品紫外扫描图

2.5 线性关系考查

精密吸取葡萄糖对照品溶液1, 2, 3, 4, 5 mL。按2.4项下的方法测定，以试剂空白为对照，在490 nm波长处测定吸光度，分别为：0.139、0.268、0.402、0.551、0.690。以葡萄糖浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为Y=0.0155X，相关系数r=0.9994(n=5)。实验表明：葡萄糖对照品在浓度9.04～44.20μg/mL范围内与吸收度呈良好的线性关系。

2.6 精密度实验

精密吸取葡萄糖对照品溶液适量，按2.4项下的方法处理测吸收度，重复测定5次，分别为：0.499、0.498、0.498、0.499、0.498，其RSD值为0.10%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性实验

精密吸取南天竹茎样品溶液适量，按2.4项下的方法每隔20min测定一次吸收度，直至60min，分别为：0.418、0.417、0.416、0.414、0.413，其RSD值为0.207%，表明样品液60min内稳定。

2.8 重复性实验

取南天竹茎粗粉样品适量，精密称定，共6份，按2.2项下的方法处理并测定样品中多糖的含量，结果南天竹茎样品多糖平均含量为1.84%，RSD值为1.09%，表明重复性良好。

2.9 回收率实验

取已知含量的南天竹茎粗粉样品6份，精密称定。定量加入葡萄糖对照品溶液，按2.4项下的方法步骤操作，计算平均回收率为99.56%， RSD值为0.70%，结果见表1。

表1 加样回收率(n=6)Table 1 Recovery Test(n=6)

表1(续)

2.10 样品含量的测定

取南天竹茎、叶粗粉各3份，每份分别称取4g，按样品制备方法制备成样品溶液，按2.4 项下的方法测定吸光度，计算含量，得多糖平均含量分别为：南天竹茎为0.49%，南天竹叶1.81%。

3 小结与讨论

南天竹茎为0.49%，南天竹叶1.81%。该方法准确可靠、结果稳定、重现性好，可用于南天竹茎、叶多糖的含量测定。通过实验表明，采集的南天竹茎、叶样品提取液显色后随着放置时间的延长多糖类成分的含量几乎不变，这一现象说明该显色方法很稳定，本实验为多糖类进一步研究提供了基础。

多糖普遍存在自然界植物体中，被认为非特异性免疫调节剂，可激活肌体的免疫活性细胞，并且在保肝、抗肿瘤、降血糖、降血脂、降胆固醇、以及促进胃溃疡愈合等方面具有显著的疗效，是具有应用价值的一类生物活性物质[8]。

[1] 李知敏,王伯初,周 菁,等.植物多糖提取液的几种脱蛋白方法的比较分析[J]. 重庆大学学报,2004,27(8):57-59.

[2] 刘锦春.南天竹资源利用与开发研究[J].中国野生植物资源,2004,23(6):22-23.

[3] 陈仕云,吴德玲,金传山,等.山核桃外蒲壳化学成分初步分析及总黄酮含量测定[J].安徽中医学院学报,2010(1):64-66.

[4] 沈炳香,吴德玲,陈仕云,等.山核桃外蒲壳总皂苷的含量测定[J].安徽医药,2009(5):513-515.

[5] 周 菁,王伯初,王 阳.浮萍多糖总糖含量测定[J].重庆大学学报,2005,28(10):111-114.

[6] 孙廷芳,梁宗锁,单长卷,等.野生酸枣果硒多糖纯化与光谱分析[J].农业机械学报,2011,42(6):148-151.

[7] 吴德玲,陈仕云,刘劲松,等.山核桃外蒲壳化学成分及抗肿瘤活性研究[J].中药材,2011(7):1055-1057.

[8] 田冰梅,谢晓梅,沈盼盼,等.分级醇宣木瓜多糖含量、分子量测定和活性初步研究[J].光谱学与光谱分析,2015,35(5):1331-1334.

(本文文献格式：何 勇，周 婷，陈仕云.紫外分光光度法测定南天竹茎、叶多糖含量[J].山东化工,2017,46(11):114-116.)

Determination of the Polysaccharide Content in Nandina Domestica Stem and Leaf by UV spectrophotometry

HeYong1,ZhouTing2,ChenShiyun3*

(1.Hefei Huafang Pharmaceutical Science & Technology Co.,Ltd.,Hefei 230088,China;2. Department of Chemical and Materials Engineering,Hefei University, Hefei 230601,China;3. Analytical & Testing Center, Hefei University, Hefei 230601,China)

Using Glucose as the standard sample, the Polysaccharide Content in Nandina Domestica Fruit、Stem and Leaf is determined using UV-spectrophotometry, and examines the different concentrations of ethanol extraction temperature on the influence of the content of polysaccharide. It shows that The UV-spectrophotometry method is simple, accurate and sensitive, which can be used as a method for the Polysaccharide in Nandina Domestica Stem and Leaf .

UV-spectrophotometry; Nandina Domestica; polysaccharide

2017-04-11

何 勇(1982—)，男，硕士研究生，助理研究员，从事新药研发；通讯作者：陈仕云(1981-)，女，安徽凤阳人，助理研究员，主要从事新药研发。

O657.32

A

1008-021X(2017)11-0114-03