不同取样量对金黄色葡萄球菌定量检测准确率的影响

□ 谢 甜 陈 亚 重庆市涪陵食品药品检验所

不同取样量对金黄色葡萄球菌定量检测准确率的影响

□ 谢 甜 陈 亚 重庆市涪陵食品药品检验所

通过调整称样量这一变量，探讨其对金黄色葡萄球菌（以下简称“金葡菌”）定量测定的影响。采用GB 4789．10-2016的方法，以金葡菌质控样加标到样品，称量不同质量的样品，测得数据并计算不同质量样品的检出率，通过检测结果比较进行方法评价。金葡菌质控样品测出结果为满意，A组（1 g）准确率为0；B组（5 g）准确率为6．3%；C组（10 g）准确率为29．2%；D组（25 g）准确率为33．3%；E组（50 g）准确率为39．6%。最后可得出称样量越大，准确率会逐渐提高，但应根据实际操作情况来确定称样量[1-2]。

金黄色葡萄球菌；定量检测；生理盐水

1 实验材料

90 mL生理盐水两瓶、无菌生理盐水2 000 mL、空锥形瓶2个、空试管10支、生理盐水稀释管9 mL/支（10支）、均质袋若干、拍打氏均质器、金黄色葡萄球菌质控样1支（中国检验检疫科学研究院测试评价中心QCFD-009 参考值：3 700 CFU/mL；参考值区间：990-14 000 CFU/mL）、BP平板50皿（北京陆桥技术股份有限公司 生产批号：170618）和重量稀释仪（interscience diluflow）。

2 实验具体步骤

（1）选样品烧烤味香菇豆干约300 g（厂家：重庆市钟无极食品有限公司 批号：2017/5/7）。

（2）取样品25 g，加225 mL生理盐水均质为供试品10-1g/mL，测定样品中金葡菌为X cfu/g，见表1。

（3）取金葡菌质控样1支，40 mL水无菌生理盐水水化，取25 mL至225 mL生理盐水中，摇匀得到10-1g/ mL，取1 mL至9 mL生理盐水稀释管中得到10-2g/mL，以此类推得到10-3g/mL，见表2。

（4）另取250 g样品，加入水化的菌液2 mL，以3 000 CFU/mL计算，则加入了6 000 CFU，均质2 min（最好用两层袋子，防破），样品中菌落理论浓度为Z=6 000/250=24 CFU/g。

（5）按表3取样进行试验，分别吸取1 mL（制备好的不同组别的样液）以0.3、0.3、0.4 mL的接种量分别加入3块BP平板，涂布，36 ℃，48 h；统计结果，以该公式（M-X）/Z×100%计算准确率。

3 实验结果分析

（1）称样量越大，准确率会逐渐提高，但是不会随称样量增大而呈一定的比例[3]。微生物检测不同于理化检测，微生物的检出具有一定的随机性，因为微生物在样品中本身具有一定的不均匀性。比如，表3中称样量为1 g的A组，检出金葡菌个数为0；说明取样量太小，取到有菌落的样品的概率太低。

（2）本实验说明了取样量越大对实验结果的准确率是越大的，有时送样样品较少，检验员擅自减少取样量，这会影响结果。从上面的数据就可以得知，理论的金葡菌菌落数约为24 CFU/g，但是不同取样量测出的结果差别还是比较大的。

（3）从整体数据上来看，准确率是比较低的，称样量最大的检出率为39.6%，主要有以下几点原因：①微生物是活的，BP平板是选择性培养基，对微生物生长有一定的抑制作用，生命力不强的菌落在竞争生长中死亡；②微生物分布本身具有一定的不均匀性，即使均质很久，也不能完全保证其分布均匀。

（4）虽然称样量越大检测的准确率越大，但是称样量过大会影响实验的实际操作。比如，称样量为50 g，稀释成10-1g/mL，则需要稀释到约500 g，均质袋装到接近2/3，不利于均质，也不利于放置。

表1 样品中金葡菌计数表

表2 金葡菌质控菌株计数表

表3 不同接种量的准确率表

4 结语

整个实验实际操作中有很多变量可以去研究，通过不断研究，可以更好地理解实验本身，掌握好试验中的关键点，对整个实验成败至关重要。

[1]吉彦莉，郭勇峰，王敬辉，等．食品微生物学检测能力验证分析[J]．公共卫生与预防医学，2015(3)：110-112．

[2]肖波，周阳，孙松松．食品中副溶血性弧菌检测能力验证分析[J]．预防医学情报杂志，2017(5)：447-449．

[3]唐爱明，王辉，夏延斌，等．食品微生物CNAS检测能力验证结果与分析[J]．食品安全质量检测学报，2012 (3)：222-225．